【摘要】目的分析miR26a在葡萄膜黑色素瘤中的表达及对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法对葡萄膜黑色素瘤细胞系sP6.5、M23及正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19行RT—PCR实验,检测3种细胞系中miR-26a的相对表达差异;将葡萄膜黑色素瘤细胞系sP6.5分成miR-26a模拟物组和Nc组,分别转染miR-26amimics和对照序列scramble,用CCK-8实验和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和凋亡;采用细胞划痕实验及Transwell实验分别检测两组细胞的迁移和侵袭能力;采用westemblot检测其下游蛋白组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EzH2)的表达水平。结果葡萄膜黑色素瘤细胞系sP6.5中miR.26a相对表达量为O.250±O.029,细胞系M23中为O.350±O.017,正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a相对表达量为1.0,在细胞系sP6.5及M23中miR-26a的相对表达量均低于正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a的相对表达量(均为P<0.001)。miR-26a模拟物组在培养72h、96h、120h0D450值(0.69±0.09、1.23±0.15、2.12±0.23)均显著低于NC组(1.39±O.11、2.35±0.25、3.53±0.27),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。miR-26a模拟物组细胞凋亡率(15.60±2.30)%高于NC组(5.00±0.70)%(P<0.01);miR-26a模拟物组划痕愈合率(23.7±2.1)%低于NC组(68.9±5.1)%(P<O.01);侵袭细胞数(45.1±3.9)个低于NC组(115.3±8.9)个(P<O.01)。miR-26a模拟物组EzH2蛋白相对表达量(o.39±0.09)低于NC组(1.0;p<0.01)。结论miR-26a在葡萄膜黑色素瘤中低表达,过袁达miR-26a显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,并抑制迁移和侵袭,其可能是通过下调EzH2的表达来发挥作用的。
   
   【关键词】miR-26a;葡萄膜黑色素瘤;增殖;凋亡;侵袭;转移;EzH2
   
   
   3讨论
   葡萄膜黑色素瘤85%起源于葡萄膜,包括睫状体、脉络膜和虹膜。影响其预后的因素包括发病部位、巩膜外侵袭、肿瘤体积、上皮细胞型还是梭状细胞型、3号染色体缺失、8q染色体的异常扩增等。目前主要治疗手段是行眼球摘除术、质子照射和放射敷贴治疗,但这些手段仅对原发性葡萄膜黑色素瘤有明显作用,对转移性葡萄膜黑色素瘤患者疗效不佳。而超过半数的原发性葡萄膜黑色素瘤会发生转移,转移部位包括肝脏、肺、骨和皮肤。许多研究表明,miRNA在肿瘤的发生及发展过程中扮演着重要的角色。
   至今已经有大量miRNA被发现,其广泛参与了生物机体的生长、分化和发育的各个阶段,在许多疾病中发挥着重要的作用。葡萄膜黑色素瘤的相关研究表明,从大豆中分离的genistein可以调控miR-271及其靶基因ZBTBl0来抑制葡萄膜黑色素瘤的生长。miR-9的表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关,在高侵袭性的葡萄膜黑色素瘤细胞中,miR-9可以在genistein的诱导下表达上调。在另外一项研究中发现,miR-34能够抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的生长和迁移,该miRNA被认为与p53抑癌网络有密切关系。