[摘要]:目的构建携带蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因的重组腺病毒载体(Ad/sv-cystatin),研究其对人肝癌细胞MHCC97H在体内、外侵袭转移的影响。方法构建携带sv-cystatin的重组腺病毒,体外感染MHCC97H细胞,采用CCK-8法检测细胞生长,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,通过裸鼠皮下肝癌细胞肺转移模型观察Ad/sv-cystatin瘤内注射对裸鼠的治疗作用。结论重组腺病毒Ad/sv-cystatin具有抑制人肝癌细胞MHCC97H体内外侵袭转移的作用,在肝癌基因治疗方面具有开发应用潜能。
   
   [关键词]:蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂;腺病毒;肝细胞癌;肿瘤侵袭;肿瘤转移
   
   3讨论
   Sv-cystatin是一种新型的Ⅱ型cystatin,其氨基酸序列的保守区与Ⅱ型cystatin(如cystatinC)十分相似,即具有N端的Gly序列和中部Gln-Xaa-Val-Xaa-Gly的cystatin基序,且都具有对半胱氨酸蛋白酶活性的调控作用,实验证实sv-cystatin具有与cystatinC等相似的抗肿瘤作用。Kopitz等采用携带cystatinC的腺病毒治疗人纤维肉瘤细胞所致的肺转移,与空腺病毒相比大大降低了裸鼠的肺转移。本实验成功构建了携带sv-cystatin基因的重组载体,获得重组腺病毒Ad/sv-cystatin,并证实Ad/sv-cystatin具有抗肿瘤作用。
   瘤内注射若能抑制肿瘤生长可能与基因作用于肿瘤细胞致使其出现变性坏死或细胞凋亡等机制有关,本实验中Ad/sv-cystatin对瘤内肝癌细胞生长的抑制作用不明显可能与其作用机制较复杂等因素相关,也可能存在腺病毒表达目的蛋白时效较短等方面的原因。