【摘要】目的探讨伽玛刀治疗对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响。方法无血清悬浮培养胶质瘤干细胞,RT-PCR检测CDl33的表达。荧光染色检测胶质瘤干细胞分化后细胞巢蛋白(nesfin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-微管蛋白的表达。10Gy伽玛射线处理胶质瘤干细胞、U87细胞48h后显微镜下观察细胞存活数;15Gy伽玛射线处理胶质瘤干细胞8~10h后免疫荧光染色检测5一溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞;流式细胞仪检测10、15Gy伽玛射线处理前后胶质瘤干细胞凋亡的变化。结果胶质瘤干细胞呈球形悬浮生长于培养基中,表达CDl33和nestin,能够分化为星形胶质细胞和神经元.说明获得的胶质瘤干细胞具有分化能力。10Gy伽玛射线处理同等密度的胶质瘤干细胞、U87细胞后U87细胞大量死亡,胶质瘤干细胞大部分存活,比较差异有统计学意义(86±3VS22±2,P<0.05);15Gy伽玛射线照射后,胶质瘤干细胞的BrdU阳性细胞率低于照射前,差异具有统计学意义[(35±0.8)%VS(22±0.8)%,P<0.05)];用不同剂量的伽玛射线处理后细胞均发生凋亡,但凋亡率很低,高剂量组凋亡率(15Gy,0.312±0.011)高于低剂量组(10Gy,O.112±0.014),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在无血清培养基培养条件下,人体胶质瘤组织能够培养出胶质瘤于细胞。伽玛刀治疗能够抑制胶质瘤干细胞的增殖,引起其凋亡,并呈剂量相关性。和胶质瘤细胞相比较,胶质瘤干细胞对伽玛刀不敏感,存在放疗抵抗性。
   
   【关键词】神经胶质瘤;胶质瘤干细胞;伽玛刀;细胞增殖;细胞凋亡
   
   
   讨论
   本实验通过无血清培养技术,从人脑胶质瘤组织中分离培养,得到了悬浮生长的细胞球。此细胞球具有nestin表达能力,呈现CDl33阳性,传代后能够再次形成细胞球且数量增多.说明细胞球具有增殖和自我更新能力,表达干细胞分子标记物;将培养所得的干细胞贴壁分化生长,细胞分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和β-tublin阳性的神经元,说明其具有分化能力;将培养得到胶质瘤干细胞种植于裸鼠的皮下,能产生肿瘤,说明了胶质瘤于细胞的成瘤特性。但是本实验在胶质瘤干细胞培养原代培养过程中,得到的胶质瘤干细胞数量较少,分析可的原因为:(1)肿瘤组织中存在的干细胞数量少,且不同肿瘤标本,干细胞数量存在差异;(2)肿瘤组织在消化、分离纯化干细胞过程中丢失部分干细胞;(3)培养过程中,人为的操作技术导致机械损伤,破坏少量干细胞。(4)不同恶性度的胶质瘤,其干细胞的数量不一。自从Singh等在2003年首次分离并鉴定出胶质瘤干细胞以来,它的生物学特性逐渐被认识,其中,其致瘤性、转移性、静息性和异质性、对药物和毒物的耐受性、放疗抵抗性。被认为是胶质瘤复发的根源。而针对胶质瘤干细胞的治疗将是有效治疗胶质瘤的方向之一。