【摘要】:目的:探讨白藜芦醇通过微小RNA(miRNA)-122调节神经酰胺水平从而治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法:高脂高胆固醇饲料喂养C57BL/6J小鼠建立非酒精性脂肪肝模型,实验分为正常对照(control)组、模型(model)组及白藜芦醇80mg/kg和160mg/kg给药组,给药4周后检测血清中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,收集肝脏,行HE染色观察肝脏脂质浸润情况,检测肝组织神经酰胺水平,real-timePCR检测miRNA-122含量,Westernblot检测肝组织中丝氨酸棕榈酰转移酶(SPT)水平。人肝癌HepG2细胞含10%小牛血清的RP-MI-1640培养基培养,实验分为正常对照组、模型(油酸诱导)组、模型+白藜芦醇给药组、miRNA-122siRNA组及白藜芦醇和miRNA-122siRNA联合给药组,除正常对照组外,各组细胞均同时给予油酸刺激或药物持续孵育24h,检测细胞匀浆中TC和TG含量、miRNA-122及神经酰胺水平,Westernblot法检测各组肝细胞中SPT水平。结果:白藜芦醇低、高剂量组均能显著降低非酒精性脂肪肝小鼠血清TC和TG水平,改善肝组织细胞中脂质浸润情况,减少miRNA-122表达,同时降低肝组织神经酰胺水平及SPT蛋白表达。细胞实验结果显示,与正常对照组相比,油酸诱导脂质沉积模型组及miRNA-122siRNA组细胞内TC和TG含量均显著增加,神经酰胺及SPT水平亦显著上升;白藜芦醇给药干预能降低油酸诱导模型组细胞中TC和TG含量、神经酰胺水平及SPT蛋白表达;与miRNA-122siR-NA组相比,白藜芦醇与miRNA-122siRNA共孵育组TC和TG含量、神经酰胺水平及SPT蛋白水平有所降低,但作用有限。结论:白藜芦醇能够显著减少整体及细胞水平非酒精性脂肪肝模型肝细胞中脂质堆积,其机制可能是白藜芦醇通过上调miRNA-122水平、下调SPT蛋白水平而减少肝细胞中神经酰胺水平,从而达到治疗非酒精性脂肪肝的作用。
   
   【关键词】:白藜芦醇;非酒精性脂肪肝;微小RNA-122;神经酰胺;丝氨酸棕榈酰转移酶
   
   讨论
   神经酰胺是细胞膜的组成成分,主要由长链脂肪酸和鞘氨醇组成。此外,神经酰胺作为第二信使参与细胞增殖、分化和凋亡等生命活动,发挥着重要的生理学作用。近来大量研究表明,神经酰胺对NAFLD的形成和发展具有重要的调节作用。Cho-cian等[8]采用高脂饲料喂养大鼠建立NAFLD模型,发现其肝细胞内神经酰胺含量明显增加;而采用多球壳菌素阻断神经酰胺的从头合成途径,能减轻高脂喂养小鼠肝内的脂肪沉积[9]。机体神经酰胺产生的途径主要有从头合成途径、鞘磷脂循环途径和鞘氨醇合成途径3种。从头合成途径是神经酰胺产生的主要途径,该途径主要发生在内质网或线粒体中,丝氨酸与棕榈酰CoA在SPT催化下形成3-酮-二氢鞘氨醇,再依次转化为二氢鞘氨醇、二氢神经酰胺,最后形成神经酰胺,其中SPT是从头合成途径的限速酶。
   
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