【摘要】:目的:探讨独蒜兰乙酸乙酯萃取物对人慢性粒细胞白血病K562细胞和急性髓性白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响以及诱导凋亡的途径。方法:采用XTT法、台盼蓝拒染法、AnnexinV-FITC/PI双染法、PI染色法、4,,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和Westernblot法研究不同浓度独蒜兰乙酸乙酯萃取物对上述2种白血病细胞增殖、凋亡、细胞周期和凋亡相关蛋白表达等方面的影响。结果:独蒜兰正丁醇萃取物对K562细胞活力几乎没有抑制作用,而乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞的活力和增殖。乙酸乙酯萃取物对于HL-60细胞作用24h的半数抑制浓度(IC50)为(42.14±2.54)mg/L,对于K562细胞的IC50为(51.28±3.12)mg/L。AnnexinV-FITC/PI和DAPI染色结果显示,乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性诱导2种细胞凋亡,且50mg/L的乙酸乙酯萃取物作用后K562细胞的凋亡率为33.1%,而HL-60细胞的凋亡率为63.1%,说明HL-60细胞对乙酸乙酯萃取物更加敏感,伴有典型的细胞核凋亡形态学改变。PI染色结果显示HL-60细胞和K562细胞都被阻滞于G2期。Westernblot结果显示,随着药物浓度的升高,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达降低,而促凋亡蛋白Bax、cleavedcaspase-3和活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达逐渐升高,内源性线粒体凋亡的特征胞浆中细胞色素C和凋亡诱导因子表达也逐渐升高。结论:独蒜兰乙酸乙酯萃取物能显著抑制K562和HL-60细胞增殖,并通过触发内源性线粒体凋亡通路诱导这2种细胞凋亡。
   
   【关键词】:独蒜兰乙酸乙酯萃取物;白血病;细胞增殖;细胞凋亡;内源性线粒体凋亡通路
   
   讨论
   近年来随着新药的出现和治疗方法的改进,白血病的完全缓解率有了明显提高,但其多药耐药性以及较高的复发率仍是目前治愈白血病的主要障碍[6]。中药提取物有可能作为治疗白血病的有效资源。我们选取山慈菇基原植物之一的独蒜兰鳞茎萃取物进行研究,期望获得有效低毒的抗白血病药物分子。从实验结果可知,独蒜兰的各个萃取部位中,正丁醇萃取物即使是800mg/L的高浓度也对慢粒白血病K562细胞活力无明显抑制作用;石油醚层萃取物400mg/L时抑制率达到81.24%,有一定抑制作用;而乙酸乙酯萃取物对这2种细胞均有很好的抑制作用,100mg/L时抑制率达到80.24%。这些结果说明抑制白血病细胞活力的活性成分主要集中在独蒜兰的乙酸乙酯萃取层中。
   
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