【摘要】:目的:研究bcl-3基因对人结肠癌RKO细胞迁移及凋亡的影响及机制。方法:采用人bcl-3基因的RNA干扰慢病毒载体沉默人结肠癌RKO细胞bcl-3基因的表达后,划痕实验观察bcl-3基因沉默前后RKO细胞迁移能力的变化,AnnexinV/PI双染色法检测bcl-3基因沉默前后RKO细胞凋亡率的变化,Westernblot法检测bcl3基因沉默前后细胞周期蛋白cyclinD1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的变化。结果:划痕实验显示,划痕后36h,bcl3基因沉默前后RKO细胞划痕愈合率分别为84.00%及40.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。AnnexinV/PI双染色法流式细胞术分析显示,bcl-3基因沉默前后的RKO细胞均经5μmol/L顺铂处理24h后,沉默前后的RKO细胞凋亡率分别为12.89%及59.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Westernblot法检测显示bcl-3基因沉默后cyclinD1蛋白表达显著下降(P<0.05),Bax蛋白表达显著上升(P<0.05),但Bcl-2表达无明显变化(P>0.05)。结论:沉默bcl-3基因后,RKO细胞迁移能力下降,凋亡率增加,并伴细胞周期蛋白cyclinD1及凋亡相关蛋白Bax表达的变化。bcl-3基因可能通过改变cyclinD1及Bax蛋白的表达而影响RKO细胞的凋亡。
   
   【关键词】:bcl-3基因;结直肠肿瘤;细胞凋亡;细胞迁移
   
   讨论
   bcl-3基因最初在B细胞慢性淋巴细胞白血病亚型的t(14;19)易位中被发现。此后的研究显示,Bcl-3蛋白在多种实体肿瘤中均可见过度表达,并可对促进肿瘤形成的基因进行调控,发挥着促进肿瘤形成及生长的作用[1]。Bcl-3在胞核内通过与p50及p52形成异源复合物而担任转录激活剂或转录抑制剂,激活或抑制靶基因的转录。Bcl-3蛋白的表达及激活可发现于胶质瘤、乳腺癌、鼻咽癌、肝癌、大肠癌、前列腺癌、黑色素瘤及多种皮肤肿瘤[1,9-10]。我们前期的研究表明,Bcl-3蛋白高表达于结肠癌RKO细胞中[8],沉默bcl-3基因表达后,RKO细胞增殖能力下降,并对奥沙利铂的敏感性增强。细胞凋亡受抑是肿瘤发生的一个重要原因,会导致肿瘤的过度生长。本研究显示沉默bcl-3基因的表达后,顺铂诱导的RKO细胞早期凋亡率及晚期凋亡率显著增加,这表明Bcl-3可通过增加细胞凋亡而影响RKO细胞生长,这和我们前期的研究结果是一致的[8]。细胞凋亡的增加也有助于提高药物敏感性,是潜在的治疗途径之一[11]。
   
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