【摘要】:目的:研究Aurora蛋白激酶抑制剂VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间同质黏附力和迁移能力的影响。方法:分别设立实验组和对照组:实验组加VX-680,总共设置3个浓度组(3.125μmol/L组、6.25μmol/L组和12.5μmol/L组);对照组加DMSO。采用细胞缓慢聚集实验和分离实验观察不同浓度VX-680对HepG2细胞间黏附能力的影响。通过划痕愈合实验检测不同浓度VX-680对HepG2细胞迁移能力的影响。Westernblot检测HepG2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果:细胞缓慢聚集实验结果显示,相比对照组,各实验组细胞所形成的细胞团块数均明显减少(P<0.01)。细胞分离实验结果显示,随着VX-680浓度的升高,NTC/NTE的比值逐渐降低,即细胞间黏附能力逐渐增强。划痕愈合实验结果显示,相比对照组,随着VX-680浓度的升高,细胞划痕愈合能力逐渐减弱。Westernblot实验结果显示HepG2细胞中E-cadherin的表达随着VX-680浓度的升高而增加(P<0.05)。结论:VX-680可以增加人肝癌细胞HepG2细胞间的同质黏附力,同时抑制其迁移。
   
   【关键词】:Aurora蛋白激酶抑制剂;肝癌;黏附能力;迁移能力
   
   讨论
   Aurora激酶在大多数恶性肿瘤中均存在高表达,如乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、食管癌和胰腺癌等。Aurora激酶的过表达可以促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡。VX-680可以抑制Aurora激酶的活性,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡[12]。肿瘤的发生和发展往往与细胞行为的改变有关。大量的研究显示,肿瘤细胞间黏附力的下降是造成肿瘤细胞发生迁移和转移的首要原因,钙黏蛋白是一类主要介导细胞间同质黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白,其中上E-cadherin能以嗜同性方式(同种分子间拉链式结合)介导同型细胞与细胞间的黏附。当E-cadherin失活时,可以促进肿瘤细胞脱离原发灶发生转移[13]。本实验主要采用细胞缓慢聚集实验和分离实验阐明了VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间黏附能力的影响。细胞缓慢聚集实验主要是通过用琼脂包被培养皿的方式模拟细胞在悬浮状态下发生聚集的情况,通过显微镜下观察细胞聚集成细胞团块的大小、数量,来判断细胞间黏附力的强弱。细胞间黏附力强,所形成的细胞团块数少,团块较大且紧密。细胞间黏附力降低时,所形成的细胞团块相对多,团块较小且疏松[14]。细胞分离实验主要是基于E-cadherin对Ca2+的依赖性而设计的。首先,我们分别用含EDTA(TE)及CaCl2(TC)的胰酶处理细胞。用含EDTA(TE)的0.2%胰酶处理细胞后,由于EDTA可以螯合金属阳离子Ca2+而抑制Ca2+依赖型钙黏蛋白E-cadherin所介导的细胞与细胞间黏附,使细胞间连接破坏,细胞分散为单个细胞。
   
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