摘要:目的了解铜绿假单胞菌(PAE)生物膜形成过程中多糖合成相关基因,lasI/lasR群体感应系统及鼠李糖脂转移酶合成相关基因rhlA在生物膜形成过程中的表达,探讨其在PAE生物膜形成中的关系及调控作用。方法分别收集非黏液型铜绿假单胞菌PAO1的浮游菌及生物被膜菌,用实时荧光定量RT-PCR的方法,对基因的表达进行相对定量分析。结果pslA1d的浮游菌表达量略高于6d生物膜菌外,algD、pelA、LasI、LasR、RhlA生物被膜菌的mRNA相对表达量均高于浮游菌,并且pslA、pelA、RhlA的mRNA相对表达量趋势一致,均是培养1d生物膜菌表达最高。结论algD、pslA、pelA、LasI、LasR、RhlA的表达与铜绿假单胞菌生物膜形成密切相关,在生物膜形成中具有重要作用,同时群体感应系统很可能参与pslA、pelA、RhlA的正向转录调节。
   
   关键词:铜绿假单胞菌;生物膜;多糖;群体感应系统;鼠李糖脂转移酶
   
   
   3讨论
   实时荧光定量RT-PCR(real-timeRT-PCR)是分子研究中的重要工具[3]。因细菌的基因组序列与RNA序列编码相同,提取PAO1细菌DNA用于制作标准曲线,结果在稀释浓度范围内线性关系良好,定量结果可靠,并且节省试剂,减少试验材料的浪费。
   生物被膜的形成过程包括3个方面:浮游细菌黏附至表面形成单细胞层;细菌通过群落生长或聚集形成微菌落,进而形成蘑菇状结构;细菌分泌细胞外多聚物包括多糖,形成基质,细菌深埋于基质内,成为成熟的生物被膜[4]。
   本次研究表明,多糖合成相关基因与以往研究不同的结果是algD的相对表达水平随生物膜形成以及培养时间的变化稍有升高[5]。其原因可能是标准曲线制作方法不同及试验条件不同,进一步证明藻酸盐为生物膜逐渐成熟起了非常重要的作用。