【摘要】:背景与目的:氯离子通道l(chlorideintracellularchannell,CLICl)是CLIC家族中的一员,研究表明CLIC1与肿瘤转移相关。本研究旨在探讨CLICl过表达在体外对小鼠肝癌低淋巴道转移细胞株Hca-P生长、体外迁移和侵袭能力的影响。方法:构建CLIC1过表达真核载体pcDNA3.1(+)-CLIC1表达质粒,将重组的pcDNA3.1(+)-CLIC1基因和空载体pcDNA3.1(+)转染Hca-P母系细胞,通过G418筛选获得稳定表达CLIC1基因的pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞株和转染空载体的pcDNA3.1(+)-Hca-P细胞株,RT-PCR和ELISA鉴定CLIC1过表达水平,CCK-8法检测细胞活力和分裂增殖能力,Transwell实验检测细胞的体外迁移能力和侵袭能力。结果:成功建立了稳定表达CLIC1基因的细胞株pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P,与空载体对照组相比,pcDNA3.1(+)-CLIC1质粒转染入Hca-P细胞后CLIC1基因表达水平显著升高。pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞增殖明显高于Hca-P母系细胞组和空载体对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞增殖主要集中在72~96h;Transwell检测各组肿瘤细胞迁移能力结果显示,pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P、pcDNA3.1(+)-Hca-P和Hca-P细胞株迁移到膜下和小室下室的平均细胞数分别为205.43±22.87、132.72±20.45和121.35±19.64。pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P与Hca-P、pcDNA3.1(+)-Hca-P细胞株比较差异有统计学意义(P<0.05);Transwell检测各组肿瘤细胞侵袭能力结果显示,pcDNA3.1(+)-CLIC1-Hca-P细胞穿过基膜的细胞数为(76.2±4.62)个,明显多于pcDNA3.1(+)-Hca-P的穿膜细胞数(48.34±3.45)个和Hca-P细胞的穿膜细胞数(49.8±5.51)个,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CLIC1过表达可以显著促进Hca-P细胞增殖、增强其侵袭能力。CLIC1有望成为临床治疗肝癌的基因治疗靶点之一。
   
   【关键词】:肝肿瘤;氯离子通道1;基因表达;增殖;迁移;侵袭
   
   讨论
   肿瘤的发生是多基因、多步骤的复杂过程,其确切的机制尚不清楚。CLIC1曾被称为NCC27,是细胞和细胞器离子通道巨大家族中第一个被明确的成员。它是一个由241个氨基酸残基组成的离子通道蛋白,分子量约为27×103。在小鼠染色体上其定位于17B1,CLIC1在脊椎动物的进化过程中高度保守,物种之间的表达差异很小[2,5]。随着研究的深入,发现CLIC1在肿瘤的发生、发展及转移过程中可能起重要作用。有研究发现,其在肝细胞癌和乳腺癌中明显高表达。胃癌CLICl的表达上调与淋巴结转移、淋巴管侵袭、周围神经侵袭、病理分期以及5年生存率显著相关。另外,有学者发现CLICl在大肠癌组织中表达上调了1.98~3.04倍、肾癌组织的CLIC1表达较正常肾组织升高2.8倍、CLIC1在胰腺癌患者血清中升高13.84倍。因此,进一步研究该基因在肿瘤细胞中的确切作用对于寻找在肿瘤发生、发展机制中起关键作用的基因有重要意义。