【摘要】:目的研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch4的靶向调控关系;构建Notch4真核表达重组质粒(pCMV-Notch4cDNA)过表达U251细胞中的Notch4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变。结果miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch4的表达,提升Notch4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01)。结论miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力。
   
   【关键词】:神经胶质瘤;微小RNA-638;侵袭;Notch4
   
   3讨论
   胶质瘤呈广泛浸润生长、易复发且细胞异型性高,是临床上恶性程度最高的颅内肿瘤。因为其所处解剖位置的特殊性,目前还没有有效的治疗措施,手术切除结合术后放疗和化疗等综合性治疗手段仍是目前主要的抗癌治疗方式,但治疗效果不容乐观。因此,开发新的胶质瘤治疗手段已是迫在眉睫。microRNA通过转录后抑制翻译或裂解靶mRNA的方式参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程的调控,是表观遗传调控的方式之一。大量的研究表明,microRNA在胶质瘤的发生发展和恶性转化过程中起着重要作用,其中miR-7能够靶向抑制EGFR的表达,降低Akt通路的过度激活,从而阻遏肿瘤的转移进程[7]。在胶质瘤细胞中抑制miR-21的表达可以恢复半胱天冬酶的表达,促进肿瘤细胞的凋亡[8]。miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,恢复miR-34a的表达可以有效抑制靶基因c-Met、Notch-1、Notch-2和CDK6的促癌作用,从而逆转肿瘤细胞的恶性表型[9]。因此,microRNA有可能成为胶质瘤分子靶向治疗的新靶点。本研究显示miR-638在胶质瘤组织中的表达水平明显高于正常神经组织,同样在胶质瘤细胞株中也有相似的结果。抑制miR-638的表达能够显著降低胶质瘤细胞的侵袭能力,反之,提高miR-638表达则能够增强胶质瘤细胞的侵袭能力。
   
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