【摘要】目的研究美罗培南体外诱导后的鲍曼不动杆菌对药物的敏感性及相关机制。方法将临床分离的3株对碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌用美罗培南体外诱导后获得突变株(MS1、MS2和MS3),对诱导前后的菌株,采用全自动药敏分析仪测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)的变化,采用肠杆菌科细菌间重复共有序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)分析其同源性,改良Hodge试验和EDTA-Na2双纸片协同法分别检测碳青霉烯酶和金属β-内酰胺酶,PCR法检测碳青霉烯酶基因,对产物进行测序分析,荧光定量PCR检测外排泵基因adeB的表达差异,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测外膜蛋白表达变化。采用t检验分析数据。结果美罗培南对鲍曼不动杆菌突变株的MIC上升,除亚胺培南、阿米卡星和多黏菌素对突变株的MIC无变化外,其他大部分抗菌药物对突变株的MIC也上升,且MS2和MS3对美罗培南的敏感性下降可稳定传代。同源性分析显示,亲本株和突变株100%同源。亲本株和突变株碳青霉烯酶和金属酶均阴性,只检测到OXA-51耐药基因。突变株adeB基因表达量为24.26±0.91,亲本株为22.81±0.38,二者差异无统计学意义(t=2.534,P>0.05)。MS1缺失相对分子质量为54000外膜蛋白,MS2和MS3缺失相对分子质量为47000外膜蛋白。结论美罗培南体外诱导后,鲍曼不动杆菌对美罗培南和常用抗菌药物的敏感性下降,可能与相对分子质量为47000外膜蛋白缺失有关。
   
   【关键词】鲍氏不动杆菌;美罗培南;微生物敏感性试验;序列同源性;外膜蛋白
   
   
   3讨论
   碳青霉烯类抗菌药物作为治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染的首选药物在临床已被广泛使用,但是长期使用使其逐渐产生了适应性突变,进而对该类药物产生耐药。有研究认为,其耐药机制主要是以下一种或几种机制的表达或共同表达:(1)碳青霉烯酶的产生,(2)细胞膜上膜孔蛋白的缺失,(3)外排泵的过表达,(4)细胞内膜上作用靶点青霉素结合蛋白结构或数量或两者皆有改变[8]。本实验在体外条件下使用美罗培南低剂量逐步诱导临床分离的碳青霉烯类敏感菌株,观察其敏感性的变化,并对变化的潜在机制进行分析。