摘要:目的探讨3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞(insulinresistant3T3-L1adipocytescell,IR-3T3-L1)最佳的建立条件。方法采用地塞米松(Dexamethason,DEX)、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(3-isobutyl-methylxanthine,IBMX)和不同浓度的胰岛素(10-8、10-7、10-6mol-L-1)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,OilredO染色确定最佳胰岛素诱导浓度,继而用1μmol-L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(Glucoseoxidase-peroxidase,GOD-POD)法对IR-3T3-L1细胞的最佳诱导时间(24~120h)及其稳定时间(24~48h)进行了考察。结果OilredO染色发现3T3-L1前脂肪细胞用DEX、IBMX和10-6mol-L-1胰岛素诱导9d,>90%的前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞;用1μmol-L-1DEX培养96h后,脂肪细胞葡萄糖消耗率达到最大(P=0.0003);稳定时间考察发现,在36h内葡萄糖消耗与对照组比较有统计学意义(P<0.001)。结论3T3-L1前脂肪细胞在1μmol-L-1DEX、0.5mmol-L-1IBMX和10-6mol-L-1最佳胰岛素浓度作用下诱导分化为成熟的脂肪细胞后,用1μmol-L-1DEX培养96h即可成功诱导成IR-3T3-L1-IR脂肪胰岛素抵抗细胞,且在36h内稳定。

     

    关键词:3T3-L1脂肪细胞;胰岛素抵抗;地塞米松;葡萄糖消耗;胰岛素

     

    3讨论

    脂肪前体细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化的特异化前体细胞。应用脂肪前体细胞建立的体外IR模型已被广泛应用于胰岛素增敏剂药物作用的评价和研究[9-11]。国外已经建立了来源于小鼠的脂肪前体细胞株,例如3T3-L1,3T3-F442A,ob17等系列,并且已被应用于医学生物学研究的各个领域。其中3T3-L1细胞株的应用最为广泛。3T3-L1细胞系是在1974年Green和Kehinde由Swissmouseembryo的3T3-L1成纤维细胞所分离克隆出来,此细胞具有高度接触抑制性,可由前脂肪细胞转换成脂肪细胞形态。3T3-L1细胞不但在体外经诱导后可以分化为成熟的脂肪细胞,而且植入小鼠体内后也可以分化并形成脂肪团块,且不易与小鼠原有的脂肪细胞区别[12]。能较好地模拟活体脂肪组织的功能,是一种研究脂肪细胞生成作用最常用的细胞株。Yi等[12]成功以0.5mmol-L-1软脂酸与25mmol-L-1的葡萄糖加0.6nm-L-1的胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗。张颖等[13]用游离脂肪酸(FFA)制备了3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。叶夏云等[14]采用10、100、1000nmol-L-1的地塞米松建立了3种不同程度的3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞,发现随着DEX浓度的增加所建立的模型胰岛素抵抗程度也增加,但是没有具体考察IR-3T3-L1模型的稳定时间。本实验发现,3T3-L1细胞从液氮中的冻存状态复苏后,培养需要传代3次,才能够有良好的增殖速率。诱导成功后的3T3-L1脂肪细胞形态变圆,胞浆亮,脂滴含量丰富,成“戒环状”结构,其外表形态、油滴大小、分布样式均与动物身上的白色脂肪细胞相似。