摘要:目的观察LING0—1对脊髓神经干细胞(spinalcordderivedneuralstemcells,sNscs)增殖及凋亡作用。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞并分为对照组及干扰组,干扰组通过LING0—1shRNA慢病毒感染sNscs下调uNG0—1表达,对照组表达空白载体,采用Brdu及TUNEL染色检测下调uNG0—1表达对SNscs增殖及凋亡的影响。结果下调LING0—1表达后,干扰组克隆球直径达到对照组克隆球直径的1.18倍,其差异具有统计学意义(p<o.05)。LING0-1干扰组及对照组Brdu阳性细胞率分别为8.5%及3.8%,而TuNEL阳性细胞率分别为8.4%及11.2%,以上结果比较差异均具有统计学意义(P<O.05)。结论下调uNG0—1表达可以促进脊髓神经干细胞增殖并且抑制细胞凋亡。

    关键词:LINGO-1;脊髓神经干细胞;脊髓损伤;细胞增殖;细胞凋亡

     

    3讨论

      本实验成功从成年大鼠脊髓中分离培养了原代神经干细胞,并利用uNGO一1shRNA对脊髓神经干细胞进行干预,观察到干扰后的神经克隆球形成能少(见图2)。进一步分析结果显示对照组及LINGO一1干扰组Brdu阳性细胞率分别为3.8%及8.5%,两组相比较差异有统计学意义(P<0.05,见图2G)。显增多(见图3)。进一步分析结果显示对照组及LINGO.1干扰组绿色荧光阳性细胞率分别为11.2%及8.4%,两组相比较有统计学差异(P<0.05,见图3G1力高于对照组。进一步观察提示下调LING0.1基因的表达可以促进脊髓神经干细胞增殖同时减少其凋亡,此结果为脊髓损伤后早期干预增加内源性脊髓神经干细胞提供体外实验证据,也为进一步促进脊髓损伤后神经修复带来希望。脊髓损伤后出现以神经元坏死、神经传导束崩解为主要表现的起始损伤和炎症反应为主要表现的二次损伤,在第一阶段中神经传导束崩解产物进一步分解成为以Nogo-A、MAG和OMgp为代表的髓鞘源性抑制因子(Hlyelin-associatedinhibitoryfactors,MAIFs),研究表明此类因子可以通过其复合受体之一LING0—1介导了多种不利于神经损伤修复的生物学作用。4J。LINGO一1是由614个氨基酸构成的跨膜生物蛋白,包括12个富亮氨酸重复序列,1个Ig区,1个跨膜区和1个短小的胞浆区∞J。研究表明,LINGO.1可以通过NgRl/P75/LINGO.1或NgRl/Tmy/uNGO一1调控RhoA途径,终使生长锥塌陷而使轴突再生受阻;也可以参与并下调EGFR,从而影响Akt通路而调控神经元存活;还可以少突胶质细胞成熟及再髓鞘化旧J。抑制LING0—1基因功能可以促进脊髓损伤后神经功能的恢复"j,但是LINGo一1对脊髓神经干细胞的增殖及凋亡作用却未见相关报道。神经克隆球的直径大小可以反映出神经干细胞固有的增殖能力,实验结果显示LINGO—l对克隆球直径具有负性作用,经过uNGO-1shRNA干扰后克隆球直径明显大于对照组。b6v等喁1在其试验中曾观察到应用LINGo-l抗体后,Nscs中Brdu阳性细胞明显增多,这与本实验所观察到的结果一致,随着uNGO一1功能受到了抑制,NSCs增殖加快,进而形成克隆球的直径也会高于对照组。