【摘要】:目的筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法。方法采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微镜下细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目结论无血清培养基以悬浮细胞培养板为载体纯化胶质瘤干细胞是较理想的方法。

【关键词】:胶质瘤细胞;胶质瘤干细胞;无血清悬浮培养;悬浮细胞培养板;CD133;Nestin

3讨论

胶质瘤是成人最常见的原发性脑肿瘤[4],约占全部颅内肿瘤的45%~55%[5],其中胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM),约占原发性脑肿瘤的16%[6],中位生存期为9~12个月[7]。目前GBM标准治疗方案是最大程度手术切除联合放疗及烷化剂辅助化疗。然而GBM5年存活率仍低于10%[8],总体中位生存期为14.6个月[8]。究其原因主要是胶质瘤细胞的分子异质性大,导致耐化疗和抗拒放疗,并且胶质瘤干细胞是胶质瘤耐药、抗拒放疗、复发的根源。胶质瘤病理级别越高,其胶质瘤干细胞含量越高。对于同一级别胶质瘤组织中胶质瘤干细胞数量和增殖存在差异,可能是由于肿瘤异质性所致。因此,胶质瘤干细胞的鉴定可为胶质瘤的监测和诊断提供重要标志物。而且,针对它进行适当的药物及生物免疫治疗,可能具有决定性的意义。

基于胶质瘤干细胞的研究现状,本实验首先通过含10%胎牛血清的高糖型DMEM培养基培养SHG44胶质瘤细胞至对数生长期,继而以培养皿、培养瓶及六孔悬浮细胞培养板为载体,用无血清培养基进行培养获得胶质瘤干细胞球,这些神经球失去了胶质瘤细胞贴壁生长的特点,呈球形悬浮状生长,不同载体中胶质瘤干细胞球的形状、大小无明显差别,但培养皿和培养瓶培养的胶质瘤干细胞球呈暗绿色,悬浮细胞培养板培养的胶质瘤干细胞球呈透明状;经第2、3次纯化后,培养皿和培养瓶中胶质瘤干细胞球呈分散、较小、不规则形生长;悬浮细胞六孔板中细胞呈较大规则球形、悬浮状生长。