[摘要]:目的建立一种测定人肝微粒体孵育体系中藏花酸浓度的HPLC内标法。方法在人肝微粒体温孵体系中加入藏花酸样品进行孵育反应,反应结束后用冰乙腈终止反应。经沉淀法处理样品后,采用DiamonsilC18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)进行分离。流动相:甲醇-2%冰乙酸水溶液(7525,v/v);流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;紫外检测波长:440nm;内标:吲哚美辛。结果藏花酸经孵育反应后质量浓度测定方法的线性范围为0.125~8μg·mL-1,线性关系良好(R2=0.9999)。藏花酸低、中、高质量浓度的提取回收率分别为:97.24%、96.58%、98.12%,其RSD均小于15%,批内、批间差异<15%,准确度为85%~115%。结论该HPLC法简便、准确,符合生物样品测定的要求,能快速、可靠地检测人肝微粒体中藏花酸的浓度。
   
   [关键词]:人肝微粒体;藏花酸;HPLC
   
   3讨论
   药物在体内的生物转换主要是经肝细胞内质网上CYP450酶系进行氧化、还原、水解等反应进行代谢。CYP450亚酶均有相应的诱导剂或者抑制剂,当这些制剂与经CYP450代谢的药物联合用药时,会影响药物的代谢,从而产生药物相互作用。藏花酸经肝脏代谢,弄清楚其主要经哪些CYP亚酶代谢是十分必要的。为了在肝微粒体水平研究藏花酸的代谢,必须建立可靠、灵敏的藏花酸检测方法。
   本实验在相关文献的基础上对人肝微粒体样品的处理及HPLC色谱方法进行了摸索。由于藏花酸微溶于水,本实验选择加入微量的吡啶,然后用PBS缓冲液稀释,结果溶解效果很好,并且对孵育反应无影响。孵育反应结束后,用冰乙腈终止反应,并采用沉淀法处理样品,该生物样品处理方法操作相对较简便。在内标的选择上,因吲哚美辛能在色谱条件下出峰,且和样品峰分离良好,无杂峰干扰,故选择吲哚美辛做内标。本实验室做藏花酸经细胞摄取后的浓度检测,同样采取该HPLC检测方法,结果也能准确地检测细胞摄取后的藏花酸浓度。