[摘要]:目的使用RNA干扰技术阻断人卵巢癌HO-8910细胞中CyclinE的表达,分析CyclinE表达受抑制后产生的一些效应,采用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质,探讨CyclinE在人卵巢癌细胞增殖中的作用,以期为人卵巢癌发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法构建质粒表达载体pU6-CyclinE-siRNA,同时设立阴性对照组和空白对照组。采用脂质体转染法稳定转染卵巢癌HO-8910细胞,G418筛选阳性克隆细胞;噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长曲线的改变;RT-PCR法比较转染前后CyclinEmRNA的表达量的变化;双向凝胶电泳-图像分析-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后蛋白质组表达的变化,鉴定差异显著的蛋白点。结论CyclinE干扰RNA干扰后卵巢癌HO-8910细胞CyclinE基因的表达明显降低,细胞增殖能力减弱。差异表达的蛋白质参与细胞的增殖、细胞信号转导调节,并与肿瘤的发生、发展、诊断密切相关。
   
   [关键词]:CyclinE;卵巢癌细胞;RNA干扰;蛋白质组学
   
   3讨论
   卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一,是最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者,却占各类妇科肿瘤的首位,对妇女生命造成严重威胁。但其发病机制至今仍不明了,且缺乏有效的早期诊断方法和治疗靶点。随着蛋白质组学的发展,就能实现从蛋白质整体水平来深入探讨卵巢癌这类多基因、多蛋白参与的复杂致病过程。利用蛋白质组学技术的高通量、高灵敏特点,能实时对阶段表达的差异蛋白进行分析,显示多因素影响下的癌细胞蛋白质组的改变,也可为卵巢癌转移复发的研究提供思路。
   卵巢癌的产生、发展不是某一个基因的作用,CyclinE也不是单独存在并且发挥作用的,它表达的下调会影响许多基因、蛋白的表达以及细胞的一系列功能。