[摘要]:目的研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总RNA提取;根据ref|NM-001043899|设计引物;RT-PCR扩增;PET-28a质粒目的基因表达载体的构建,转化大肠杆菌BL21(DE3);Westernbolt检测重组CRABP;采用MEGA5工具包和clustalw2进行同源性分析;采用ProtParamTools预测CRABP的理化性质;采用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。利用Preprod、IEDB和DNAStar对CRABP蛋白T、B细胞抗原表位进行预测。结论克隆并表达的家蚕CRABP蛋白具有良好的变应原性,为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。
   
   [关键词]:家蚕;细胞视黄酸结合蛋白;原核表达;变应原性鉴定;生物信息学分析
   
   3讨论
   家蚕是丝绸原料的主要来源,是我国特有的经济昆虫。在我国,家蚕是引起过敏性反应疾病的重要过敏原。由于家蚕在变态发育过程中会脱落大量蜕皮和鳞毛,人通过吸入和接触这些物质,会引发过敏性反应疾病,症状可从轻微的皮疹、瘙痒、肿胀到危及生命的过敏性休克。在日常生活中,由于接触的床上用品和衣物有家蚕丝制品,故家蚕也被视为一个重要的室内过敏原。细胞视黄酸结合蛋白属于细胞内脂质结合蛋白家族,与视黄酸的表达和作用关系紧密。在Wang等研究中的MTT数据显示,当家蚕细胞中CARBP大量表达时,会对家蚕细胞内全反式视黄酸诱导生长抑制这个过程产生明显的抵制。本研究克隆的家蚕CRABP的基因序列全长399bp,可编码132个氨基酸。