【摘要】:目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumornecrosisfactorreceptorassociatedfactor6,TRAF6)的表达后,对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖能力的影响,以期构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型,并阐明TRAF6对成牙本质细胞增殖的调控作用。方法将针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体pSUPER—TRAF6siRNA转染MDPC-23(转染组),空载体对照组采用pSUPER空载体质粒,空白对照组MDPC-23细胞不转染任何质粒,采用氨基糖苷类抗生素G418抗性筛选。结论稳定转染pSUPER.TRAF6siRNA后可以显著降低MDPC-23细胞中TRAF6的表达,表明构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型成功;TRAF6基因沉默可以使MDPC一23细胞的增殖能力增强,将影响成牙本质细胞形成和修复牙本质的能力,表明TRAF6是调控牙本质发育及损伤修复过程的重要信号分子。
   
   【关键词】:RNA干扰;转染;细胞增殖;肿瘤坏死因子受体相关因子6
   
   3讨论
   成牙本质细胞是牙髓牙本质复合体的连接纽带和特征性细胞,它不仅参与牙齿发育过程中牙本质的形成,也参与了龋病进程中牙本质的损伤修复及牙髓病时牙髓组织的免疫炎症反应等,研究成牙本质细胞的功能调控机制有助于全面解析牙齿发育、损伤与修复等生理病理过程。
   本实验通过细胞生长曲线观察、MTT比色法及FCM检测细胞增殖指数PrI值,结果表明TRAF6基因沉默后可使MDPC-23细胞增殖能力增强,提示成牙本质细胞过度增殖可能导致其形成牙本质的量增加或牙本质结构异常,不仅与TRAF6基因敲除后出现牙齿形态异常关系密切,也可能通过促进成牙本质细胞增殖分化和形成修复性牙本质,影响龋病、磨耗、牙髓病等疾病的发生及发展。今后将利用本实验构建的TRAF6基因沉默的MDPC一23细胞模型,进一步深入解析TRAF6对成牙本质细胞矿化、损伤修复能力等多种功能的影响,以期为牙齿发育及其相关疾病的防治研究寻求新亮点。