【摘要】目的利用RNA干扰技术下调细胞周期蛋白Y(CyclinY,CCNY)基因的表达,观察其对喉癌Hep-2细胞增殖的影响。方法构建针对CCNY基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)真核表达载体,包装慢病毒感染喉癌Hep-2细胞。将细胞分为2组,对照组和实验组(感染CCNYshRNA慢病毒组)。运用Real-timePCR检测CCNY在RNA水平的变化;四甲基偶氮唑蓝法和平板克隆形成实验检测CCNY表达下调对细胞增殖的影响。结果成功包装表达CCNYshRNA的慢病毒并感染Hep-2细胞,shRNA下调CCNY的表达后,与对照组相比CCNY在mRNA水平的表达显著下降,抑制率为75.3%(P<0.05)。表达CCNYshRNA的慢病毒感染5d后,继续培养6d,细胞的生长明显受到抑制(P<0.001)。细胞在体外培养10d后形成克隆的潜力降低了60%。结论靶向CCNY基因RNA干扰能够阻抑喉癌Hep-2细胞的CCNY表达,抑制细胞增殖,CCNY基因有望成为喉癌基因治疗靶点。
   
   【关键词】细胞周期蛋白类;喉肿瘤;细胞系,肿瘤;RNA,小分子干扰;细胞增殖
   
   
   讨论
   细胞周期蛋白是一类与细胞周期功能状态密切相关的蛋白质家族,其表达水平随着细胞周期发生涨落,可通过与特定蛋白激酶结合并激活其活性,从而在细胞周期的不同阶段发挥调控作用。细胞周期蛋白自1982年被发现至今,已被明确报道与人类多种肿瘤的发生和发展有密切的关系。比如。CyclinD和CyclinE被发现在人类多种肿瘤细胞中过表达。
   CCNY在人类睾丸eDNA文库中首次被发现,是最新发现的一个细胞周期蛋白家族成员。使用酵母双杂技术发现,CCNY可与PFTK1相互作用。PFTK1是一个细胞周期蛋白激酶,通过CyclinD3相互作用调节细胞周期进展和细胞增殖。此外,CCNY与PFTKl的结合不仅仅增强了PFFKl的激酶活性,还可见PFTKl招募至质膜。然而,CCNY调控喉癌细胞增殖的作用目前尚无报道。