关键词:WesternBlot 核内蛋白 C-JUN 细菌培养皿 接种环 接种针

 

  利用SIRT1激动剂白藜芦醇观察髓核细胞核蛋白中AP-1亚基C-JUN蛋白的表达水平。

实验分组:①Control组②TNF-α20ng/ml浓度刺激24小时③Res(100μmol/L)预处理24小时+TNF-α20ng/ml浓度刺激24小时核蛋白提取

1.收集细胞,加入预先用PMSF混合试剂A进行裂解。

2.高速涡旋离心细胞10-15秒,以完全将细胞吹散,冰浴15分钟。

3.加入试剂B,高速涡旋离心5秒,冰浴1分钟。

4.高速涡旋离心5秒,超低温离心机中4℃,12000转/分钟,离心5分钟。

5.离心完毕后,尽可能去上清,以免胞浆蛋白污染,加入混合PMSF试剂的核蛋白抽提试剂。

6.高速涡旋离心25秒,将沉淀完全吹散,于冰浴30分钟,期间每隔2分钟进行高速涡旋离心25秒。

7.冰浴完毕于超低温离心机中4℃,12000转/分钟,离心10分钟.

8.将上清吸入EP管中,-80长期保存。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm