关键词:蛋白质 电转 科进 Kirgen 爱思进 Axygen 康宁 corning 耐思 NEST 白鲨易 biosharp

 

实验材料
蛋白质
 
试剂、试剂盒
转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液
 
仪器、耗材
电转移槽 电泳仪
 
实验步骤
1.  剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。
2.  将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。
3.  按下列过程安装转移装置,将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中,在塑料支架上放一块海绵。
4.  将3块3MM滤纸对齐放在海绵上,然后依次将NC膜、凝胶、及另3块虑纸和海绵放上。
5.  用塑料支架夹紧上述各层,放入电转移槽内,NC膜一侧向正极,凝胶一面向负极。
6.  接通电源电压120 mA,转移6小时以上或过夜。
7.  转移结束后,取出塑料支架,依次取掉各层,用铅笔在膜的上沿作好标记,切下其中一个孔所对应膜的一半,用氨基黑或考马士亮兰染色,检查转移效果。
8.  将其余的NC膜放在一张干净的3 MM 滤纸上,室温干燥30~60分钟(可不做)。
 
注意事项
1.  虑纸及膜的大小不应大于待转移胶的大小,否则在转移过程中会发生短路,影响转移效果。
2.  操作中应戴手套,切不可用手直接触摸,因手上的汗和分泌物将直接影响到蛋白从胶向膜的转移。
3.  放置NC膜和滤纸时,每层之间不应有气泡,否则将影响转移效果。
4.  待转移蛋白分子量决定转移时间,分子量大,转移时间长,反之则小。
5.  干燥虽然可使蛋白质更牢固地结合到膜上,但也可能加剧蛋白的质变性,影响其免疫反应活性。
 
 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

阿拉丁

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁

耐思

伯乐

硕华

皎洁

密理博

创博环球

碧云天

新星

白鲨易

科进

卧宏生物

爱思进

科晶

肖特

离心管

八排管

移液管

程序降温盒

免疫组化笔

滤芯吸头

巴氏吸管

加样槽

冻存盒

细胞冻存管

酶标板

载玻片

封口膜

移液器

细胞计数板

PCR板

细胞刮刀

接种针

细胞培养小室

细胞滤网

透析袋

乳胶手套

ELISA

血清

抗体

雷磁

求精

广州洁特

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏

金佰利

科默斯

武汉华美生物

其林贝尔

Biofroxx

Pall

爱马斯

麦迪康

世泰

Parafilm

古洛玻璃

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金

Gibco

CST

Santa

DSHB

GeneTex

Thermo

Novus

lifespan

millipore

RD