关键词:细胞 提取RNA 科进 Kirgen 爱思进 Axygen 康宁 corning 耐思 NEST 白鲨易 biosharp

 

实验材料
LCM 帽子
 
试剂、试剂盒
乙醇 糖原 RNA 提取试剂盒 超纯水
 
仪器、耗材
移液器
 
实验步骤
一、材料
1. 缓冲液、试剂和溶液
 
75% 乙醇 (超纯水配制)
 
糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)
 
StratageneRNA 提取试剂盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),
 
包括变性溶液、饱和酚 (存于 4°C)、β-巯基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:异戊醇、
 
2mol/L 乙酸钠、异丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分离试剂盒(KIT0202,Arcturus,
 
MountainView,CA)
 
DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 储存)
 
2. 特殊设备
移液器
 
无 RNA 酶的 1.5 ml 管子
 
3. 细胞和组织
 
来自方案 3 的 LCM 帽子
 
二、方法
1. 加入 200ul 变性溶液和 1.6ulβ-巯基乙醇到 0.5 ml 管子中。
2. 将 LCM 帽子插入管子,涡旋 5s。
3. 倒置管子孵育 5 min。
4. 移去 LCM 帽子。这一步获得的样品可以在-80°C 保存 6 个月。
5. 将溶液转移到 1.5 ml 管子中。
6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸钠,温和混匀。
7. 加入 220ul 水饱和的酚(底层),温和混匀。
8. 加入 60ul 氯仿:异戊醇,剧烈晃动。
9. 放于冰上 15 min。
10.14000r/min4°C 离心 30 min。
11. 吸上层溶液到新管子中。
12. 加入 2ul 糖原(最终浓度 10~150ug/ml)。
13. 加入 200ul 冷异丙醇。
14.-80°C 过夜。
 
 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

阿拉丁

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁

耐思

伯乐

硕华

皎洁

密理博

创博环球

碧云天

新星

白鲨易

科进

卧宏生物

爱思进

科晶

肖特

离心管

八排管

移液管

程序降温盒

免疫组化笔

滤芯吸头

巴氏吸管

加样槽

冻存盒

细胞冻存管

酶标板

载玻片

封口膜

移液器

细胞计数板

PCR板

细胞刮刀

接种针

细胞培养小室

细胞滤网

透析袋

乳胶手套

ELISA

血清

抗体

雷磁

求精

广州洁特

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏

金佰利

科默斯

武汉华美生物

其林贝尔

Biofroxx

Pall

爱马斯

麦迪康

世泰

Parafilm

古洛玻璃

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金

Gibco

CST

Santa

DSHB

GeneTex

Thermo

Novus

lifespan

millipore

RD