关键词:蛋白质 过甲酸氧化 科进 Kirgen 爱思进 Axygen 康宁 corning 耐思 NEST 白鲨易 biosharp

 

试剂、试剂盒
过氧化氢 甲酸
 
仪器、耗材
冰 水浴锅
 
实验步骤
 
材料与设备
 
过氧化氢(新鲜)(30%)
 
甲酸(可得的最高纯度级)
 
冰/水浴锅
 
操作程序
 
此操作程序系根据 Hirs(1967) 的方法修改而成。
 
1) 制备过甲酸试剂,将过氧化氢与甲酸以 1:19(v/v) 的比例(比如,0.5 ml 的过氧化氢和 9.5 ml 的甲酸) 混合在一起。室温(25℃) 下, 混合物必须严格地在密闭容器中静置整整 2 h。
2) 过甲酸试剂置冰/水浴中。将待氧化的蛋白质溶解于甲酸(通常浓度为 lmg/ml 时即可满足要求)。再将溶解的蛋白质样品置于冰/水浴中。让蛋白质样品和过甲酸试剂两者同时静置于冰/水浴中 30min,使之均至冰冷。
注:单有冰块不能使试管及冰/水浴锅冷却。
3) 加 2~3 倍(按体积)过量的过甲酸试剂于蛋白质样品。反应混合物在冰/水浴中孵育 2.5 h。
4) 加少量(总体积的 10%) 纯水(去离子水或蒸馏水)于反应混合物,彻底混匀。在真空离心机中挥发除去甲酸、过甲酸和水,至干。将蛋白质样品重溶于水,再用真空离心机重新干燥。
 
注:从有机酸如甲賅干燥蛋白质样品时,不会以白色或晶状物质出现,而是以透明的"玻璃"状出现。因此,不要期望能很容易地看见试管底部的干燥的蛋白质。如果举灯照射清洁的试管,则可由透射光的变化观察到干燥的蛋白质。
 
 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

阿拉丁

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁

耐思

伯乐

硕华

皎洁

密理博

创博环球

碧云天

新星

白鲨易

科进

卧宏生物

爱思进

科晶

肖特

离心管

八排管

移液管

程序降温盒

免疫组化笔

滤芯吸头

巴氏吸管

加样槽

冻存盒

细胞冻存管

酶标板

载玻片

封口膜

移液器

细胞计数板

PCR板

细胞刮刀

接种针

细胞培养小室

细胞滤网

透析袋

乳胶手套

ELISA

血清

抗体

雷磁

求精

广州洁特

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏

金佰利

科默斯

武汉华美生物

其林贝尔

Biofroxx

Pall

爱马斯

麦迪康

世泰

Parafilm

古洛玻璃

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金

Gibco

CST

Santa

DSHB

GeneTex

Thermo

Novus

lifespan

millipore

RD