关键词：细胞伤口 愈合 科进 Kirgen 爱思进 Axygen 康宁 corning 耐思 NEST 白鲨易 biosharp
实验方法原理
在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域，然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象，即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。该方法可以定量，适用于自动化系统高通量筛选。
实验材料
人MDA-MB-231细胞
试剂、试剂盒
DMEM培养基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 结晶紫
仪器、耗材
24孔培养板 枪头 细胞培养仪
实验步骤
1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。
2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中，生长24小时后，单层细胞融合度应达到70-80%。
3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕，划痕横穿过孔，枪头尽量与板孔的底部垂直，不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。
4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕，每孔划痕成十字交叉型。
5.划痕后，用培养基轻轻的清洗板孔2次，以去除脱落细胞。
6.每孔添加新鲜培养基。
7.（培养基中含有某些成分，如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质）
8.细胞生长48小时（或根据时间需要）。
9. 1xPBS清洗细胞两次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。
10. 1%的结晶紫（2%乙醇溶解）染色30分钟。
注意事项
为了降低实验结果的可变性，建议每孔选择多个视野观察，每组做多个重复。
其他
gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量，为了降低实验结果的可变性，建议每孔选择多个视野观察，每组做多个重复。
实验所需耗材：
|
细胞培养板 |
细胞培养瓶 |
细胞培养皿 |
玻底培养皿 |
玻底培养板 |
|
细胞爬片 |
阿拉丁 |
细胞筛网 |
血清瓶 |
细菌培养皿 |
|
康宁 |
耐思 |
伯乐 |
硕华 |
皎洁 |
|
密理博 |
创博环球 |
碧云天 |
新星 |
白鲨易 |
|
科进 |
卧宏生物 |
爱思进 |
科晶 |
肖特 |
|
离心管 |
八排管 |
移液管 |
程序降温盒 |
免疫组化笔 |
|
滤芯吸头 |
巴氏吸管 |
加样槽 |
冻存盒 |
细胞冻存管 |
|
酶标板 |
载玻片 |
封口膜 |
移液器 |
细胞计数板 |
|
PCR板 |
细胞刮刀 |
接种针 |
细胞培养小室 |
细胞滤网 |
|
透析袋 |
乳胶手套 |
ELISA |
血清 |
抗体 |
|
雷磁 |
求精 |
广州洁特 |
盐城华鸥 |
蜀牛 |
|
kimble chase |
Falcon |
WATSON |
罗氏 |
金佰利 |
|
科默斯 |
武汉华美生物 |
其林贝尔 |
Biofroxx |
Pall |
|
爱马斯 |
麦迪康 |
世泰 |
Parafilm |
古洛玻璃 |
|
merck |
abcam |
生工生物 |
天根生化 |
全式金 |
|
Gibco |
CST |
Santa |
DSHB |
GeneTex |
|
Thermo |
Novus |
lifespan |
millipore |
RD |
耗材咨询