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实验方法原理
在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域,然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象,即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。该方法可以定量,适用于自动化系统高通量筛选。
 
实验材料
人MDA-MB-231细胞
 
试剂、试剂盒
DMEM培养基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 结晶紫
 
仪器、耗材
24孔培养板 枪头 细胞培养仪
 
实验步骤
1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。
2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中,生长24小时后,单层细胞融合度应达到70-80%。
3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕,划痕横穿过孔,枪头尽量与板孔的底部垂直,不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。
4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕,每孔划痕成十字交叉型。
5.划痕后,用培养基轻轻的清洗板孔2次,以去除脱落细胞。
6.每孔添加新鲜培养基。
7.(培养基中含有某些成分,如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质)
8.细胞生长48小时(或根据时间需要)。
9. 1xPBS清洗细胞两次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。
10. 1%的结晶紫(2%乙醇溶解)染色30分钟。
 
注意事项
为了降低实验结果的可变性,建议每孔选择多个视野观察,每组做多个重复。
 
其他 
gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量,为了降低实验结果的可变性,建议每孔选择多个视野观察,每组做多个重复。 
 
 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

阿拉丁

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁

耐思

伯乐

硕华

皎洁

密理博

创博环球

碧云天

新星

白鲨易

科进

卧宏生物

爱思进

科晶

肖特

离心管

八排管

移液管

程序降温盒

免疫组化笔

滤芯吸头

巴氏吸管

加样槽

冻存盒

细胞冻存管

酶标板

载玻片

封口膜

移液器

细胞计数板

PCR板

细胞刮刀

接种针

细胞培养小室

细胞滤网

透析袋

乳胶手套

ELISA

血清

抗体

雷磁

求精

广州洁特

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏

金佰利

科默斯

武汉华美生物

其林贝尔

Biofroxx

Pall

爱马斯

麦迪康

世泰

Parafilm

古洛玻璃

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金

Gibco

CST

Santa

DSHB

GeneTex

Thermo

Novus

lifespan

millipore

RD