关键词：蛋白质凝胶电泳 凝胶 细胞培养板 细胞培养瓶 细胞培养皿 玻底培养皿 玻底培养板
实验方法原理
将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS)以及硫基乙醇一起加热，使蛋白质变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链考疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线性关系。
实验材料
丙烯酰胺
试剂、试剂盒
去离子水 SDS 浓盐酸 Tris 过硫酸胺 TEMED 甘氨酸
仪器、耗材
电泳槽 电泳仪 加样器 吸头
实验步骤
1. 根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板，确定需配制分离胶的浓度和体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液”所列成分（见书末附录）配制所需分离胶；
2. 迅速将分离胶注入两玻璃板间隙中，留出灌注积层胶所需空间（梳子的齿长再加1cm，用滴管小心地在分离胶上覆盖一层0.1% SDS（当丙烯酰胺浓度≤8%时）或异丁醇或水（当丙烯酰胺浓度≥10%时），覆盖层可防止氧扩散进入凝胶而抑制聚合反应。将凝胶垂直置于室温下；
3. 分离胶聚合完全后，倒出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的丙烯酰胺，尽可能排除凝胶上的液体；
4. 确定需配制浓缩胶的体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液”（见书末附录）配制所需浓缩胶，然后直接将浓缩胶灌注在分离胶上，立即插入干净的配套梳子，避免气泡，然后加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙。待浓缩胶聚合后，拔出梳子，形成加样孔；
5. 用去离子水将Tris-甘氨酸电泳缓冲液贮存液稀释5倍，倒入电泳槽，将加样孔充满，这时加样孔中的气泡可通过电泳缓冲液排除。
注意事项
1. 由于与凝胶聚合有关的硅橡胶称、玻璃板表面不光滑洁净，在电泳时会造成凝胶板与玻璃板或硅橡胶条剥离，产生气泡或滑胶；剥胶时凝胶板易断裂，为防止引现象，所用器材均应严格地清洗。硅橡胶条的凹槽、样品槽模板及电泳槽用泡沫海绵蘸取“洗洁净”仔细清洗。玻璃板浸泡在重铬酸钾洗液3-4h或0.2mol/L KOH的酒精溶液中20min以上，用清水洗净，再用泡沫海绵蘸取“洗洁净”反复刷洗，最后用蒸馏水冲洗，直接阴干或用乙醇冲洗后阴干。
2. 安装电泳槽和镶有长、短玻璃板的硅橡胶框时，位置要端正，均匀用力旋紧固定螺丝，以免缓冲液渗漏。样品槽板梳齿应平整光滑。
3. 在不连续电泳体系中，预电泳只能在分离胶乡合后进行。洗净胶面后才能制备浓缩胶。浓缩胶制备后，不能进行预电泳，以充分利用浓缩胶的浓缩效应。
4. 电泳时，电泳仪与电泳槽间正、负极不能接错，以免样品反方向泳动，电泳时应选用合适的电流、电压，过高或过低无可影响电泳效果。
5. SDS纯度：在SDS-PAGE中，需高纯度的SDS,市售化学纯SDS需重结晶一次或两次方可使用。重结晶方法如下：称20g SDS放在圆底烧瓶中，加300ml无水乙醇及约半牛角匙活性碳，在烧瓶上接一冷凝管，在水浴中加热至乙醇微沸，回流约10min,用热布氏漏斗趁热过滤。滤液应透明，冷却至室温后，移至-20℃冰箱中过夜。次日用预冷的布氏漏斗抽滤，再用少量-20℃预冷的无水乙醇洗涤白色沉淀3次，尽量抽干，将白色结晶置真空干燥器中干燥或置40℃以下的烘箱中烘干。
6. 用SDS处理蛋白质样品时，每次都会在沸水溶中保温3——5min,以免有亚稳聚合物存在。
7. 标准蛋白质的相对迁移率最好在0.2——0.8之间均匀分布。值得指出的是，每次测定未知物分子量时，都应同时用标准蛋白制备标准曲线，而不是利用过去的标准曲线。用此法测定的分子量只是它们的亚基或单条肽链的分子量，而不是完整的分子量。为测得精确的分子量范围，最好用其他测定蛋白分子量的方法加以校正。此法对球蛋白及纤维状蛋白的分子量测定较好，对糖蛋白，胶原蛋白等分子量测定差异较大。
8. 对样品的要求：应采纳低离子强度的样品。如样品中离子强度高，则应透析或经离子交换除盐。加样时，应保持凹形加样槽胶面平直。加样量以10-15μl为宜，如样品系较稀的液体状，为保证区带清晰，加样量可增加，同时应将样品溶解液浓度提高二倍或更高。
9. 由于凝胶中含SDS,直接制备干板会产生龟裂现象。如需制干板，则用25%异丙醇内含7%乙酸浸泡，并经常换液，直到SDS脱尽（约需2-3天），才可制备干板。为方便起见，常采用照像法，保存照片。
其他
不连续聚丙酰胺凝胶电泳包含两种不同缓冲液成分、ph值和凝胶孔径，而且在电泳过程中形成的电位梯度均不同，由此产生了浓缩效应、电荷效应和分子筛效应：
（1）浓缩效应：样品在开始电泳时，通过浓缩胶浓缩成高浓度的样品薄层；
（2）电荷效应：在均一电势梯度和PH的分离胶中，由于各蛋白质的等电点不同所带电荷量不同，在电场中所受到的引力不同，经过一段时间的电泳，各种蛋白质就以一定顺序排列成一条条蛋白质区带；
（3）有分离胶孔径较小，分子量大小和分子形状不同的蛋白质通过分离胶后，所受的阻滞程度不同，因而迁移率不同而被分离。
实验所需耗材：
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细胞培养板
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细胞培养瓶
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细胞培养皿
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玻底培养皿
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玻底培养板
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细胞爬片
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细胞刮刀
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细胞筛网
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血清瓶
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细菌培养皿
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康宁(corning)
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耐思(NEST)
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伯乐(BIO-RAD)
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硕华(Sorfa)
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皎洁(JIAO JIE)
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密理博(millipore)
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创博环球(GLOBALEBIO)
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耐思细胞培养皿1150mm
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新星(NEWSTAR)
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白鲨易(biosharp)
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科进(Kirgen)
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卧宏生物(WHB)
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爱思进(Axygen)
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科晶(Crystalgen)
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肖特(SCHOTT)
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细胞培养板6孔
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细胞培养板12孔
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细胞培养板24孔
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细胞培养板48孔
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细胞培养板96孔
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细胞培养锥形瓶
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细胞培养透气盖悬浮摇瓶
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细胞培养锥形瓶125ML
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细胞培养锥形瓶250ML
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细胞培养锥形瓶500ML
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细胞培养锥形瓶1000ML
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细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML
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细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML
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细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML
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细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML
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硕华细胞培养瓶T25
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硕华细胞培养瓶T75
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硕华细胞培养瓶T175
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耐思细胞培养瓶T25
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耐思细胞培养瓶T75
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耐思细胞培养瓶T125
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耐思细胞培养瓶T175
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耐思细胞培养瓶T225
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细胞培养瓶密封盖
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细胞培养瓶密封盖
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雷磁
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求精
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广州洁特(jet)
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盐城华鸥
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蜀牛
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kimble chase
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Falcon
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WATSON
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罗氏(Roche)
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金佰利
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科默斯
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武汉华美生物(CUSABIO)
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其林贝尔(Kylin-Bell)
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Biofroxx
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Pall
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爱马斯(AMMEX)
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麦迪康(Medicom)
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世泰(CITOTEST)
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Parafilm
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古洛玻璃(GOLO)
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merck
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abcam
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生工生物
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天根生化
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全式金
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Gibco
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CST
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Santa
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DSHB
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GeneTex
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Thermo
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Novus
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lifespan
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millipore
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RD
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碧云天
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阿拉丁
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索莱宝
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天恩泽
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诺博莱德
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