小鼠背部创面白色念珠菌感染模型的建立

发布时间:2021-09-11 浏览次数: TAG: 小鼠 创面 白色念珠菌 感染模型 碧云天 阿拉丁 索莱宝 天恩泽 诺博莱德

关键词:小鼠 创面 白色念珠菌 感染模型 碧云天 阿拉丁 索莱宝 天恩泽 诺博莱德

 

  动物实验通过上海交通大学动物研究委员会的批准并严格按照国家卫生研究院的指导方针进行。

  6-8周龄的成年雌性BALB/c裸鼠购自上海第二军医大学动物实验中心,并饲养于上海交通大学医学院附属第三人民医院动物实验中心(常温,12小时的光/暗交替环境)。实验前准备:将微量移液器、酒精灯、无菌枪头、改良马丁琼脂培养基平板、改良马丁液体培养基、接种环、无菌离心管等实验用品放入生物安全柜,常规紫外线灭菌15分钟,实验者戴好口罩、帽子,然后使用75%酒精的脱脂棉球对生物安全柜操作台进行再次消毒,双手戴好实验专用丁腈手套,并用75%酒精消毒。将保存有白色念珠菌菌落的改良马丁琼脂培养基平板取出,用酒精灯火焰对接种环进行灭菌后,使用无菌接种环挑取单个菌落加入装有10ml改良马丁液体培养基的15ml无菌离心管中,将离心管置于37℃,150转/分的恒温摇床中培养16-24小时。于次日在恒温摇床中取出离心管,将离心管置于离心机中离心5分钟(3700转/分)后得到菌体,然后将菌体用PBS洗涤2次并重新悬浮于改良马丁液体培养及中。测量菌液OD值,调整OD在600nm时为1.0,此时相当于菌液浓度为1x108CFU/mL。使用离心机将白色念珠菌菌液再次离心,然后用PBS将白色念珠菌菌液较之前浓缩10倍,即浓度为1x109CFU/ml备用。动物实验前准备:更换工作鞋,洗手并烘干,戴好口罩、帽子、手套,穿好隔离衣,穿鞋套,经过风淋室风淋进入动物房,然后使用紫外灯对动物实验室进行灭菌15分钟。首先给小鼠称重,准确计算麻醉剂用量,用1ml注射器抽取1%戊巴比妥钠溶液腹腔注射(75mg/kg),待小鼠麻醉成功后,用75%的酒精棉球对小鼠背部消毒后,使用无菌剪刀和镊子在小鼠背部制作1.0cmx1.0cm的全层皮肤缺损。24只小鼠随机平均分为3组:蓝光干预组(菌+,光+)、阳性对照组(菌+,光-)和阴性对照组(菌-,光-)。小鼠背部创面制作完成10分钟后,使用微量移液器各取20ul浓度为1x109CFU/ml的白色念珠菌菌液滴在蓝光干预组和阳性对照组的小鼠背部创面上,并用无菌接种环涂匀,阴性对照组滴加等量的生理盐水并涂匀。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金

Gibco

CST

Santa

DSHB

GeneTex

Thermo

Novus

lifespan

millipore

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