噬菌体文库的铺平板和转移实验

发布时间:2021-06-22 浏览次数: TAG: 噬菌体文库 铺平板 merck abcam 生工生物 天根生化 全式金

关键词:噬菌体文库 铺平板 merck abcam 生工生物 天根生化 全式金

 

【摘要】文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但在扩增时由于克隆的生长速率不同,文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

【内容】基本方案

 

实验材料

噬菌体

 

试剂、试剂盒

琼脂糖LBNaOHSSCTris·Cl

 

仪器、耗材

硝酸纤维素膜培养箱

 

实验步骤

1. 通过系列等比稀释滴定噬菌体文库的滴度。 

2. 重组噬菌体与铺平板的宿主菌混合于培养试管中(表一),于37℃温育20min。 表一、噬菌体文库铺平板组分最佳配制方法 

3. 按每个平板的噬菌体数决定筛选文库时将用到的平板数。

4. 该数目取决于文库中重组噬菌体的数目和目的克隆出现的概率。

5. 在试管中加入0.7%顶层琼脂糖,并迅速倾倒在37℃保温的LB上平板上,37℃培养约6~12h,至噬斑布满平板,但大小适当互不相连。

6. 平板置于4℃1h以上方可用于滤膜影印实验。 

7. 用原珠笔在硝酸纤维滤膜上做好标记,标记面朝上。

8. 将滤膜覆盖在预冷的长有噬斑的LB平板上1~10min用20-G针头穿刺标明定位方向后。

9. 用平头镊子取出滤膜,面朝上轻放在纸巾或滤纸上,室温晾干10min以上。 

10. 接着,滤膜转印面朝上,依次放在3张分别饱蘸下面3种液体的Whatman3MM滤纸上,各1~2min。

(1)0.2mol/lNaOH/1.5mol/lNaCl;

(2)0.4mol/lTris·ClpH7.6/2×SSC;

(3)2×SSC 10. 将滤膜置于真空烤箱中80℃干烤90~120min,或者置于42℃的恒温箱中过夜,若暂不做杂交实验,滤膜可用干燥的滤纸夹好,室温保存。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)

merck

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