关键词:DNA纯化 merck abcam 生工生物 天根生化 全式金

 

【摘要】DNA纯化可用于:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)测序、遗传信息分析等分子生物学应用。

【内容】PCR清洁试剂盒纯化法DNA凝胶回收试剂盒纯化法

 

实验方法原理

  硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。 

 

实验材料

PCR产物

 

试剂、试剂盒

PCR清洁试剂盒

 

仪器、耗材

96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板

 

实验步骤


一、试剂盒组成、贮存、稳定性

 1. 说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6ml深孔板,96孔V型底板。 

2. BufferPCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。 

3. BufferW2concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。 

4. Eluent:2.5mMTris-HCl,pH8.

5。室温密闭贮存。 
 

二、操作步骤

  用户可以选择负压法或离心法。

 A.负压法 

1A. 正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100ul,加至100ul);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。

 2A. 加0.3mlBufferW2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤两次。 *确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 

3A. 保持负压将96孔DNA制备板抽吸10min。 

4A. 导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。 

5A. 将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30ul水或Eluent,室温静置1min。3000xg离心5min洗脱DNA。

B.离心法 

1B. 在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的BufferPCR-A(若BufferPCR-A不足100ul,加至100ul);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,1000xg离心1min,弃滤液。 

2B. 在96孔DNA制备板中,加0.3mlBufferW2,1000xg离心1min,弃滤液。以同样的方法再用0.3mlBufferW2洗涤一次。 *确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 

3B. 将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,3000xg离心10min。 

4B. 将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30ul水或Eluent,室温静置1min。3000xg离心5min洗脱DNA。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)

merck

abcam

生工生物

天根生化

全式金