关键词:炎症应激 FAT CD36 脂质积聚 科进 Kirgen 卧宏生物 WHB 爱思进 Axygen 科晶 Cystalgen 肖特 SCHOTT
1.2.6油红O染色观察脂质蓄积情况
(1)C57BL/6J小鼠肝脏组织冰冻切片室温放置5min后,用PBS洗涤2次后,10%甲醛溶液室温固定30分钟;
(2)配制油红O工作液:将0.2%油红O储存液与ddH2O按3:2的比例混合,室温放置10分钟,滤纸过滤,1小时内使用;
(3)吸去10%甲醛溶液,ddH2O洗涤2次;
(4)加入适量1,2-丙二醇,室温下孵育2min,然后移去1,2-丙二醇,无需洗涤;
(5)加入油红O工作液染色25分钟;
(6)吸去油红O工作液,ddH2O洗涤3次,加入苏木精染色液染色5分钟;
(7)ddH2O轻轻冲洗5分钟;
(8)甘油明胶封片,正置显微镜观察肝细胞内脂质蓄积情况,并拍照保存。
1.2.8肝脏RNA提取
(1)取100mg肝脏组织装入2ml去RNA酶EP管中,每管中加入1mlTrizol,用组织研磨机碾磨至均匀。
(2)1ml移液枪反复吹打使细胞充分裂解,静置5min;
(3)每管加入氯仿200ul之后用力震荡,静置于冰上,5min分层后,于低温离心机4℃,12000g离心15min;
(4)可见上层为透明上清液,小心吸取上清至另一干净去RNA酶EP管中,加入500ul异丙醇,混匀静置10min,之后低温高速离心,4℃,12000g离心10min
(5)离心之后可见管底白色沉淀,即为RNA,弃上清,加入75%乙醇,上下颠倒EP管,使沉淀浮起,继续低温高速离心,4℃,12000g离心5min,弃乙醇;
(6)打开EP管盖子干燥5—15min,加入1%DEPC水40—50ul/管,混匀;
(7)于微量核酸蛋白分析仪检测RNA浓度。
实验所需耗材:
细胞培养板 |
细胞培养瓶 |
细胞培养皿 |
玻底培养皿 |
玻底培养板 |
细胞爬片 |
细胞刮刀 |
细胞筛网 |
血清瓶 |
细菌培养皿 |
康宁(corning) |
耐思(NEST) |
伯乐(BIO-RAD) |
硕华(Sorfa) |
皎洁(JIAO JIE) |
密理博(millipore) |
创博环球(GLOBALEBIO) |
耐思细胞培养皿1150mm |
新星(NEWSTAR) |
白鲨易(biosharp) |
科进(Kirgen) |
卧宏生物(WHB) |
爱思进(Axygen) |
科晶(Crystalgen) |
肖特(SCHOTT) |
细胞培养板6孔 |
细胞培养板12孔 |
细胞培养板24孔 |
细胞培养板48孔 |
细胞培养板96孔 |
细胞培养锥形瓶 |
细胞培养透气盖悬浮摇瓶 |
细胞培养锥形瓶125ML |
细胞培养锥形瓶250ML |
细胞培养锥形瓶500ML |
细胞培养锥形瓶1000ML |
细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML |
细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML |
细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML |
细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML |
硕华细胞培养瓶T25 |
硕华细胞培养瓶T75 |
硕华细胞培养瓶T175 |
耐思细胞培养瓶T25 |
耐思细胞培养瓶T75 |
耐思细胞培养瓶T125 |
耐思细胞培养瓶T175 |
耐思细胞培养瓶T225 |
细胞培养瓶密封盖 |
细胞培养瓶密封盖 |
雷磁 |
求精 |
广州洁特(jet) |
盐城华鸥 |
蜀牛 |
kimble chase |
Falcon |
WATSON |
罗氏(Roche) |
金佰利 |
科默斯 |
武汉华美生物(CUSABIO) |
其林贝尔(Kylin-Bell) |
Biofroxx |
Pall |
爱马斯(AMMEX) |
麦迪康(Medicom) |
世泰(CITOTEST) |
Parafilm |
古洛玻璃(GOLO) |