关键词:炎症应激    FAT    CD36    脂质积聚    科进    Kirgen    卧宏生物    WHB    爱思进    Axygen    科晶    Cystalgen    肖特    SCHOTT

 

1.2.6油红O染色观察脂质蓄积情况

(1)C57BL/6J小鼠肝脏组织冰冻切片室温放置5min后,用PBS洗涤2次后,10%甲醛溶液室温固定30分钟;

(2)配制油红O工作液:将0.2%油红O储存液与ddH2O按3:2的比例混合,室温放置10分钟,滤纸过滤,1小时内使用;

(3)吸去10%甲醛溶液,ddH2O洗涤2次;

(4)加入适量1,2-丙二醇,室温下孵育2min,然后移去1,2-丙二醇,无需洗涤;

(5)加入油红O工作液染色25分钟;

(6)吸去油红O工作液,ddH2O洗涤3次,加入苏木精染色液染色5分钟;

(7)ddH2O轻轻冲洗5分钟;

(8)甘油明胶封片,正置显微镜观察肝细胞内脂质蓄积情况,并拍照保存。

1.2.8肝脏RNA提取

(1)取100mg肝脏组织装入2ml去RNA酶EP管中,每管中加入1mlTrizol,用组织研磨机碾磨至均匀。

(2)1ml移液枪反复吹打使细胞充分裂解,静置5min;

(3)每管加入氯仿200ul之后用力震荡,静置于冰上,5min分层后,于低温离心机4℃,12000g离心15min;

(4)可见上层为透明上清液,小心吸取上清至另一干净去RNA酶EP管中,加入500ul异丙醇,混匀静置10min,之后低温高速离心,4℃,12000g离心10min

(5)离心之后可见管底白色沉淀,即为RNA,弃上清,加入75%乙醇,上下颠倒EP管,使沉淀浮起,继续低温高速离心,4℃,12000g离心5min,弃乙醇;

(6)打开EP管盖子干燥5—15min,加入1%DEPC水40—50ul/管,混匀;

(7)于微量核酸蛋白分析仪检测RNA浓度。

                                                 实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)