一氧化碳中毒所致迟发性脑病大鼠模型的建立

关键词：一氧化碳    迟发性脑病    大鼠模型    科进   Kirgen   卧宏生物   WHB   爱思进   Axygen   科晶   Cystalgen   肖特   SCHOTT

1.2.5灌注取材及HE染色

大鼠称重，用10%水合氯醛(0.3mL/100g)腹腔注射，麻醉成功后，暴露胸腔及心脏，将注射用针头从左心室心尖处穿刺入主动脉，剪开右心耳，用生理盐水将血液冲洗干净，待肝脏颜色变淡、右心耳流出的液体清亮后，用4%多聚甲醛溶液经灌注器进行灌注固定，先快后慢，固定约40～50min，直至大鼠全身僵硬，断头取出脑组织，放入4%多聚甲醛溶液中后固定6h，然后将标本按所需取材放入20%蔗糖溶液过夜，组织块沉底后再放入30%蔗糖溶液过夜，待其再次沉底后进行－20℃恒冷切片机连续切片，切片厚18μm。将载有标本的载玻片在60℃烘干箱中烤4～6h。HE染色步骤：（一）切片放入蒸馏水中5min；（二）切片放入苏木精中染色5～10min，自来水漂洗5～10s，冲净浮色；（三）盐酸酒精中分色数秒，置镜下观察满意为止，自来水漂洗1～2min；（四）氨水中返蓝5～10s，自来水漂洗10～30s；（五）伊红中染色1～2min，自来水漂洗1～2s，冲净浮色；（六）70%、80%、90%、95%酒精中各5min；（七）100%酒精Ⅰ、Ⅱ各10min；（八）二甲苯Ⅰ、Ⅱ中透明各15min，中性树胶封片，光学显微镜下观察。

1.2.6DEACMP模型制备成功的标准

参照日本学者Ochi等[16]关于DEACMP动物模型制备成功的判断标准。用水迷宫实验证实动物发生认知功能障碍，同时HE染色计数海马组织内有细胞损伤，即判断为DEACMP动物模型制备成功。

                                                实验所需耗材：