关键词:日本血吸虫 重组质粒 pGEX-Sj26GST 大肠埃希菌 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR 白鲨易 biosharp

 

1.2.3重组质粒pGEX-Sj26GST在E.coli中的诱导表达

(1)将经重组质粒(pGEX-Sj26GST)转化后的E.coli菌液加入含Amp的LB培养液中,于摇床上常温(220r/min)培养;(2)当细菌培养至对数生长期(OD600约为0.5~0.8)时,取适量作为未诱导对照,其余加入1mmol/L的IPTG6μl诱导表达;(3)于诱导后1~13h每2h收集1mL菌液待查。

1.2.4重组质粒pGEX-Sj26GST表达产物的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析

(1)离心菌液收集菌体;(2)加入蛋白上样缓冲液稀释菌体,煮沸5min;进行SDS-PAGE鉴定;(3)用薄层凝胶扫描对表达的重组蛋白进行分析。

1.2.5免疫印迹(Westernblot)鉴定

(1)转移诱导表达的菌体蛋白经SDS-PAGE电泳后,用半干转移系统转移至NC膜上(未诱导菌体作为对照);(2)封闭取下NC膜,磷酸盐缓冲液(PBS)振洗3次,每次5min,加入封闭液于室温摇床上封闭2h;PBS洗膜3次,每次5min,加入Sj感染的兔血清(兔血清:封闭液=1:100)4ml,室温摇床孵育2h;PBS洗膜3次,每次5min,加入HRP标记羊抗鼠IgG(IgG:封闭液=1:1000)4ml,室温摇床孵育2h,PBS洗膜3次,每次5min,(3)显色成像加入DAB避光反应15~20min,用蒸馏水洗膜后成像。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)