关键词:MIP-1α MMP-9 Ⅲ型前列腺炎 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR 白鲨易 biosharp

 

1.5MIP-1α、MMP-9的检测

ELISA法测定前列腺液中MIP-1α、MMP-9的含量。采用相应ELISA试剂盒,严格按试剂盒说明书操作。EPS室温离心20分钟,2000转/分。收集上清液于无菌Eppendorf管分装备用。严格按照ELSIA试剂盒说明书操作。检测MIP-1α和MMP-9时,样本分别稀释15倍和2倍。450nm波长酶标仪读取OD值(15分钟内)。

操作步骤:(1)标准品的稀释:在酶标包被板上设标准孔10孔,在第一二空中分别加标准品100μl,然后在第一二空中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一、二中孔各取100μl分别加到第三、四孔,再在第三、四孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第三、四孔中各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、六孔,再在第五、六孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第五、六孔中各取50μl分别加到第七、八孔,再在第七、八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第七、八孔中各取50μl分别加到第九、十孔,再在第九、十孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第三、四孔中各取50μl弃掉。

(2)加样:分别设空白空(空白对照孔不加样品激酶标试剂,其余步骤相同)、待测样品空。在酶标包被板上待测样品空先加稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(待测样品先由样品稀释液稀释3倍,最终稀释倍数15倍)。

(3)温育:盖上封板膜,轻轻振荡混匀置37℃温育30min。

(4)配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释20倍后备用。

(5)洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30s后弃去,如此重复5次,拍干。

(6)加酶:每孔加酶标试剂50μl,空白空除外。温育:操作同(3)。洗涤:操作同(5)。

(7)显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15min。

(8)终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

(9)测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15min以内进行。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)