关键词:ERS 非ERS ATF6 XBP1启动子 差异性调控 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR 白鲨易 biosharp

 

1.2实验方法

1.2.1细胞培养与转染

  实验取对数生长期细胞按Lipofectamine2000试剂说明,转染时24孔板中每孔0.2μg重组PGL3-XBP1、pcDNA3.1(-)-ATF6/pcDNA3.1(-)-ATF6(S2P)/pcDNA3.1(-)-ATF6(S1P)/pcDNA3.1(-)-SP及4ngPRL-SV40稀释到50μl无血清DMEM中每组设计3个平行样品,转染6h后换10%FBS的DMEM。以pGL3-Basic为阴性对照,pGL3-control为阳性对照,比较ATF6及三个缺失体在ERS与非ERS状态下对XBP1启动子转录活性的影响。

1.2.2双荧光素酶报告基因检测

  细胞转染48h后收集处理细胞,检测每组中双荧光素酶活性。

1.2.3免疫印迹

  37℃,5%CO2浓度下培养C28I2细胞生长至对数期,转染时6孔板中每孔分别加入2μg重组质粒pcDNA3.1(-)-ATF6、pcDNA3.1(-)-ATF6(S2P)、pcDNA3.1(-)-ATF6(S1P)、pcDNA3.1(-)-SP稀释到125μl无血清DMEM中;125μl无血清DMEM稀释5μlLipofectamine2000试剂,设计pcDNA3.1(-)和无处理组为对照,转染6h后换10%FBS的DMEM。48h后提取蛋白通过westernblot检测XBP1蛋白含量的表达。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)