关键词:硫氧还蛋白还原酶 肝癌切除术 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR 白鲨易 biosharp

 

1.4.2固相ELISA双夹心法

(1)包被:用碳酸盐缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为2μg/mL。在每个酶标板反应孔中加0.1mL,4℃过夜。次日,弃去孔内液体,用洗涤缓冲液洗板3次,每次3min。

(2)加样:加入含有TrxR蛋白的血清(同时做空白对照,阴性对照孔)0.1mL于上述已经包被的反应孔中,置于湿盒中,37℃,孵育1hr。用洗涤缓冲液洗板3次,每次3min。

(3)加酶标抗体:于各反应孔,加入新鲜稀释的酶标抗体0.1ml。孵育0.5-1hr,用洗涤缓冲液洗板3次,每次3min。

(4)加底物液显色:在各反应孔中加入现配的TMB底物溶液0.1mL,37℃,孵育10-30min。

(5)终止反应:在各反应孔中加入终止液0.05mL。

(6)结果判定:将酶标板在酶标仪(Sunrise全自动酶标仪,瑞士)上,于450nm读数,输出到Excel中。

(7)计算结果:以标准品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,生成标准曲线和直线回归方程式,根据公式计算未知样品的浓度,并记录。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)