关键词:Transwell实验 细胞侵袭能力 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)将1ml无菌移液器枪头及Transwell小室置于4℃冰箱预冷过夜;

(2)Matrigel基质胶置于4℃冰箱至完全融化后,每个Transwell小室内加入50μl(缓慢加入,避免产生气泡影响细胞移动),水平放置于37℃孵育箱孵育1h至基质胶完全凝固;

(3)24孔板内加入300μl完全培养基,将Transwell小室水平置于24孔板内(注意放入小室时小室底部与培养基液面不能产生气泡,否则会影响细胞侵袭结果);

(4)采用细胞传代培养方法收集细胞,低血清(2%血清浓度)培养基重悬细胞,取10μl细胞混悬液进行计数;

(5)每个Transwell小室内加入5×103个细胞(加入细胞前充分混匀细胞混悬液后沿Transwell小室壁缓慢加入细胞混悬液,轻柔铺种至小室内,使细胞密度均一);5%CO2,37℃培养24h;

(6)使用镊子将Transwell小室移出24孔板,使用预冷PBS溶液清洗5min×2次;

(7)将Transwell小室置于4%多聚甲醛溶液中固定30min,预冷PBS溶液泡洗5min;

(8)棉签轻轻擦去小室内细胞后将Transwell小室置入结晶紫染液中染色1h;PBS清洗结晶紫染液及小室内细胞;

(9)自然晾干Transwell小室,镊子将小室底滤膜拆下,平铺于载玻片,中性树胶进行封片,自然风干;

(10)普通显微镜下进行图像采集,每个Transwell小室采集5张图片,每个小室设置3个复孔;

(11)使用ImageJ图像处理软件进行细胞计数,Photoshop图像处理软件整理编辑图片,SPSS22.0统计软件进行统计分析,p<0.05提示有统计学意义,最后使用GraphPad软件进行作图。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)