关键词:细胞划痕修复实验 细胞迁移 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)于6孔板背面横向画5条平行辅助线,两两间距为0.5cm;

(2)收集对数期生长细胞,6孔板每孔接种1×105细胞,添加完全培养基2ml及青-链霉素混合液20μl,水平“十字”晃动6孔板20次,使细胞均匀分布;

(3)37℃,5%CO2培养,期间注意观察细胞是否被污染;

(4)待细胞汇合度达到95%左右时使用无菌移液器枪头及标尺进行划痕(垂直于辅助线),保证每个孔板划痕宽度一致,无菌PBS洗涤,去除脱落细胞及细胞碎片,每孔加入新鲜配培养基2ml及青-链霉素混合液20μl;

(5)分别于划痕后0h,24h,48h及72h在显微镜下采集图像;

(6)3个复孔,每孔采集5个视野,(于每条横向辅助线下方采集图像,保证每个时间点采集图像均为同一个视野);

(7)采用Photoshop图像处理软件进行图像整理及细胞迁移距离测量,用SPSS22.0软件进行统计分析,p<0.05有统计学意义,最后使用GraphPad软件绘制统计图。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)