关键词:细胞克隆形成实验 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)于6孔板内添加完全培养基2ml及青链霉素混合液20μl,收集对数生长期细胞,6孔板每孔接种1×103个细胞(细胞呈单个离散状态,如果有细胞团将影响实验结果),水平“十字”晃动6孔板20次,使细胞均匀分布;

(2)37℃,5%CO2培养,每72h更换培养基一次,培养周期为14d,期间每天于显微镜下观察细胞是否被污染及细胞克隆形成情况;

(3)第14d终止培养,弃培养基,预冷PBS溶液洗涤细胞5min,去除坏死细胞及细胞碎片;

(4)4%多聚甲醛溶液固定30min,冰上进行,移除多聚甲醛溶液,PBS洗涤5min×2次;

(5)加入结晶紫溶液2ml进行染色,染色时间2h,PBS洗涤2min(洗涤时间过长会消退结晶紫染色),去除背景;

(6)照相机采集图像,人工计数细胞克隆数目,用SPSS22.0软件进行统计分析,p<0.05有统计学意义,最后使用GraphPad软件绘制统计图。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)