关键词:稳定细胞株筛选 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)普通显微镜下观察50ml培养瓶内细胞汇合度,当细胞汇合至80%左右时,于荧光显微镜下观察细胞荧光强度(病毒除携带目的基因片段外,还携带增强型绿色荧光和嘌呤霉素抗性基因,转染细胞成功后,细胞会编码绿色荧光蛋白);

(2)如果目测转染率在70%以上,则可进行稳定沉默/过表达细胞株筛选,如果转染率低于70%则按照病毒感染的方法进行二次病毒感染;

(3)移除培养基,PBS洗涤5min×2次,除去死细胞及细胞碎片,加入2ml完全培养基,同时加入2μl嘌呤霉素(1μl嘌呤霉素/1ml培养基),充分混匀,5%CO2,37℃继续培养;

(4)每24h重复步骤3,待空白对照组细胞完全死亡后,转染慢病毒组继续重复步骤3两次后停止加入嘌呤霉素,调整为常规细胞培养;

(5)荧光显微镜下采集细胞稳定表达绿色荧光蛋白图片,对稳定转染的细胞进行扩大培养,并大量冻存备用(反复传代会导致细胞老化,传代超过15代需要更换细胞,以保证实验结果准确可靠)。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)