关键词:病毒感染 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)按照细胞传代方法收集对数生长期细胞,接种到10ml的一次性无菌培养瓶,每瓶内接种细胞数目为2×105,5%CO2,37℃培养,待细胞汇合度接近30%时进行病毒感染(也可以选择在细胞贴壁后即进行感染,感染效果更佳);

(2)将病毒原液置于冰上自然融化(切勿加热,否则会影响病毒活性),根据不同细胞最宜MOI值计算需要添加病毒数目及病毒原液体积;

(3)移除培养基,PBS溶液洗涤2次,加入无血清培养基2ml(含1%双抗),同时加入病毒原液及polybrene转染增强液(转染增强液按8μl/ml添加);

(4)空白对照组仅加入同等体积的polybrene转染增强液,不添加病毒原液,轻摇混匀,5%CO2,37℃培养12h,弃旧培养基,PBS洗涤2次,添加2ml完全培养基,5%CO2,37℃继续培养(24h后即可在荧光显微镜下观察到成功转染慢病毒的细胞发出绿色荧光);

(5)待细胞汇合度达到75%左右时,进行传代培养,按照1传(即1小瓶传至1大瓶)的传代方式将10ml培养瓶内细胞传至50ml培养瓶内继续培养。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)