关键词:细胞计数 DIMT1 胃癌细胞 恶性生物学行为 密理博 millipore 创博环球 GLOBALEBIO 新星 NEWSTAR  白鲨易 biosharp

 

(1)使用75%的酒精消毒液反复喷洗擦拭细胞计数板及盖玻片,将盖玻片覆盖于计数板上方计数区域;

(2)将待计数细胞使用2ml完全培养基重悬,充分混匀后取25μl细胞混悬液至500μl离心管内,同时向管内加入25μl0.4%台盼蓝染液,充分混匀;

(3)取10μl细胞混悬液从计数板边缘缓慢滴入,使细胞悬液均匀充满计数板及盖玻片之间的空隙(注意不要让细胞混悬液溢出计数板计数区域,同时应缓慢滴入避免气泡产生,影响计数准确性);

(4)倒置显微镜下观察计数:镜下观察染上蓝色的细胞为死细胞,未染色且反光性强的细胞为活细胞;

(5)统计计数板大方格(4个区域,即左上、左下、右上及右下,每个大方格内有4×4=16个小方格)内细胞数目,如细胞位于方格线上,则仅统计左侧线及下方线上细胞;如方格视野中有两个或者多个细胞组成的细胞团,则仅统计细胞团数目,如细胞团数目超过总数目的10%,则提示细胞重悬不充分,需要重新计数;

(6)根据如下公式计算细胞数目:细胞数(1ml)=4个大方格内细胞数/4×104×稀释倍数(每一个大方格面积为0.01cm2,高为0.01cm,体积为10-4cm3即10-4ml,故每ml细胞数目需要×104)。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)