关键词:乳腺癌 CAFs氧化型ATM 细胞自噬 外泌体GPR64 乳腺癌细胞侵袭 康宁 corning 耐思 NEST 伯乐 BIO-RAD 硕华 Sorfa

 

1.5.1乳腺癌CAFs外泌体提取

  接种CAFs细胞,常规培养,当细胞生长至融合度达到约80%时,施加处理因素,处理结束后立即收集细胞条件培养基、提取细胞蛋白。将细胞条件培养基以3000g、15min离心,取上清,与提取试剂ExoQuick-TC以5:1混匀,颠倒3次,静置12h。以1500g、30min离心弃去上清,再以1500g、5min离心进一步去除上清,加入100μLPBS重悬沉淀,于-80°C保存备用。

1.5.2透射电子显微镜观察外泌体形态[5]

(1)取一滴exosome悬液滴加到Formvar-carbon铜片上,在干燥环境中放置

20min。

(2)取100μLPBS缓冲液滴加在封口膜上,将铜片倒置在PBS液滴上清洗。

(3)将铜片放置在1%戊二醛液滴上固定5min,再放置在双蒸水液滴上清洗8次,每次2min。

(4)将铜片放置在草酸双氧铀液滴上5min,再放置在甲基纤维素液滴上10min。

(5)用滤纸轻轻吸去多余液体,放置在空气中干燥10min,于透射电子显微镜下观察外泌体形态。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

康宁(corning)

耐思(NEST)

伯乐(BIO-RAD)

硕华(Sorfa)

皎洁(JIAO JIE)

密理博(millipore)

创博环球(GLOBALEBIO)

耐思细胞培养皿1150mm

新星(NEWSTAR)

白鲨易(biosharp)

科进(Kirgen)

卧宏生物(WHB)

爱思进(Axygen)

科晶(Crystalgen)

肖特(SCHOTT)

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

雷磁

求精

广州洁特(jet)

盐城华鸥

蜀牛

kimble chase

Falcon

WATSON

罗氏(Roche)

金佰利

科默斯

武汉华美生物(CUSABIO)

其林贝尔(Kylin-Bell)

Biofroxx

Pall

爱马斯(AMMEX)

麦迪康(Medicom)

世泰(CITOTEST)

Parafilm

古洛玻璃(GOLO)