JAZF1基因表达上调对高脂喂养小鼠肝脏促炎因子的影响及机制

关键词：JAZF1基因 高脂喂养 小鼠 肝脏促炎因子 耐思玻底培养皿20mm 独立灭菌玻底培养皿 灭菌TC玻底培养皿 硕华玻底培养皿15mm 硕华玻底培养皿20mm

1.2.5肝脏组织总RNA提取

1.2.5.1肝脏组织离取与保存

小鼠断颈处死，用75%医用酒精消毒手术区域3次，利用无菌剪刀剪开小鼠腹壁，暴露肝脏；更换无菌剪刀快速、轻柔离段肝脏，切防淤血；采集的肝脏组织，利用预冷的无菌生理盐水洗涤组织残留血液，利用滤纸吸干残留液体，用剪刀剥离附属胆囊等组织后立即保存于液氮罐。

1.2.5.1总RNA提取

①利用液氮预冷高压的研钵（钵必须经0.1%DEPC浸泡36h，高压蒸汽灭菌，高温烘烤12h），并使研钵中留有少量液氮，取出液氮罐保存的肝脏组织（约50-100mg）迅速置于研钵中（研钵必须残留液氮），即刻加入1mLTrizol分离液后，研磨成均匀粉末状；室温放置，待粉末融化（约5min，必要时可研磨助溶）；②将融化后的溶液转移至1.5mlEP管，冰上静置10min，低温12000rpm离心10min，将上清吸出至另一新灭菌的无酶EP管；③加入0.2ml氯仿，充分震荡混匀约30s，冰上静置5min。低温12000rpm离心15min；④将上清吸入1.5ml离心管中，加入等体积（约0.4ml）冰异丙醇，轻柔上下颠倒8-10次，冰上静置10min，低温12000rpm离心10min；⑤弃去上清液并吸尽液体，加1ml预冷DEPC水配置的75%乙醇，4℃、低温12000rpm离心5min；⑥重复上步骤；⑦弃去上清液并吸尽液体，室温静置5min左右，待乙醇挥发干净，利用0.1%DEPC水溶解沉淀，混匀，产物进行逆转录PCR；⑧吸取2.5µl，用核酸浓度紫外检测仪测定所提取的总RNA的浓度；⑨利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取的总RNA的纯度。

实验所需耗材：