关键词:JAZF1基因 高脂喂养 小鼠 肝脏促炎因子 耐思玻底培养皿20mm 独立灭菌玻底培养皿 灭菌TC玻底培养皿 硕华玻底培养皿15mm 硕华玻底培养皿20mm

 

1.2.5肝脏组织总RNA提取

1.2.5.1肝脏组织离取与保存

小鼠断颈处死,用75%医用酒精消毒手术区域3次,利用无菌剪刀剪开小鼠腹壁,暴露肝脏;更换无菌剪刀快速、轻柔离段肝脏,切防淤血;采集的肝脏组织,利用预冷的无菌生理盐水洗涤组织残留血液,利用滤纸吸干残留液体,用剪刀剥离附属胆囊等组织后立即保存于液氮罐。

1.2.5.1总RNA提取

①利用液氮预冷高压的研钵(钵必须经0.1%DEPC浸泡36h,高压蒸汽灭菌,高温烘烤12h),并使研钵中留有少量液氮,取出液氮罐保存的肝脏组织(约50-100mg)迅速置于研钵中(研钵必须残留液氮),即刻加入1mLTrizol分离液后,研磨成均匀粉末状;室温放置,待粉末融化(约5min,必要时可研磨助溶);②将融化后的溶液转移至1.5mlEP管,冰上静置10min,低温12000rpm离心10min,将上清吸出至另一新灭菌的无酶EP管;③加入0.2ml氯仿,充分震荡混匀约30s,冰上静置5min。低温12000rpm离心15min;④将上清吸入1.5ml离心管中,加入等体积(约0.4ml)冰异丙醇,轻柔上下颠倒8-10次,冰上静置10min,低温12000rpm离心10min;⑤弃去上清液并吸尽液体,加1ml预冷DEPC水配置的75%乙醇,4℃、低温12000rpm离心5min;⑥重复上步骤;⑦弃去上清液并吸尽液体,室温静置5min左右,待乙醇挥发干净,利用0.1%DEPC水溶解沉淀,混匀,产物进行逆转录PCR;⑧吸取2.5µl,用核酸浓度紫外检测仪测定所提取的总RNA的浓度;⑨利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取的总RNA的纯度。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm