关键词:Transwell小室 细胞侵袭 GAS5 人胶质瘤细胞 生物学行为  微量离心管 离心管 血清移

 

(1)Transwell小室的准备:

1.ECM原液提前1h放在4℃冰箱解冻,实验前转移到冰盒中。

2.预冷1.5mlEP管、枪头盒。

3.将Transwell小室放置于24孔板中,将ECM用无血清培养基稀释成使用液(1:10),用枪吸取60μl加入到每个Transwell小室中,尽量避免有气泡。4.37℃培养箱放置2h。

(2)制备细胞悬液

PBS清洗细胞两次,用胰酶消化,在细胞刚变圆时吸出胰酶,加入无血清培养基轻柔吹打。细胞计数板计数,将细胞稀释成10x104/ml的细胞悬液。

(3)接种细胞

1.Transwell小室上室中加入200µl细胞悬液。

2.下室中加入500µl完全培养基,尽量去掉出现的气泡。常规培养24h。每组设3个复孔,实验重复3次。

(4)固定及染色

1.用棉签擦去基质胶和上室内的细胞,PBS洗两次,多聚甲醛固定30min。

2.用0.1%结晶紫染色30min,然后用PBS洗净,在上室和下室中均加入PBS。

(5)拍照并计数

在200倍倒置显微镜下分别计数穿过膜的细胞并拍照,随机选取6个视野,取其平均值。

1.2.10Transwell小室检测细胞迁移能力

使用未包被ECM的Transwell小室,其余同侵袭实验。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm