BRIT1过表达对宫颈癌细胞增殖、周期、凋亡、侵袭与转移的影响

发布时间:2020-07-16 浏览次数: TAG: BRIT1过表达 宫颈癌 细胞增殖 微量离心管 离心管 血清移

关键词:BRIT1过表达 宫颈癌 细胞增殖 微量离心管 离心管 血清移

 

1.2.5DAPI染色检测细胞凋亡

①按1.2.1方法操作慢病毒感染SiHa细胞,继续培养。

②72h后,将细胞培养液和洗涤细胞后的PBS以及胰蛋白酶消化的细胞悬液收集于离心管中,1000×g,离心5min。

③弃上清,用少量PBS重悬细胞,吸2μl细胞悬液涂布在载玻片上,自然风干,冰冻甲醇固定10min;PBS轻轻洗5min。

④滴加DAPI染液覆盖在细胞涂片上,避光染色15min。

⑤用荧光显微镜成像系统记录实验结果。

1.2.6吖啶橙染色检测细胞凋亡

①按1.2.1方法操作慢病毒感染SiHa细胞,继续培养。

②72h后,将细胞培养液和洗涤细胞的PBS以及胰蛋白酶消化的细胞悬液收集于离心管中,1000×g,离心5min。

③弃上清,用200μlPBS重悬细胞,加5μl吖啶橙染液,混匀,避光染色30min后,吸取50μl细胞悬液,滴于玻片上,加盖玻片。

④用荧光显微镜成像系统记录实验结果。

1.2.7流式细胞术检测细胞凋亡

①按1.2.1方法操作慢病毒感染HeLa、SiHa、CaSki细胞,培养72h后,将细胞培养和洗涤细胞的PBS以及胰蛋白酶消化的细胞悬液(细胞数>1×105)一起收集于离心管中,1000×g离心5min。

②收集细胞沉淀,加1mlPBS,轻柔地吹打细胞沉淀,将细胞悬液转移至棕色的EP管中,1500rpm,离心6min。

③弃上清液,加350μl结合缓冲液,慢慢地吹打沉淀,混匀。

④加4μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的AnnexinV,混合均一,处理10min。

⑤加8μl碘化丙啶(PI)染色液,混合均一,冰上处理10min。

⑥将经双染的细胞悬液经流式细胞术分析,获得各个组细胞的凋亡图谱。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm