关键词:双萤光素酶 基因检测 HOTAIR 卵巢上皮性癌 生物学 微量离心管 离心管 血清移

 

(1)于24孔板接种稳定转染的细胞,细胞浓度为2x104。放于细胞培养箱培养过夜。

(2)观察细胞状态,细胞融合约70%时转染质粒。转染试剂采用Endofectin™-Plus。根据说明书步骤操作。将质粒DNA(2µg)和100nMmiRNAmimics用DMEM培养基溶解后,加入12ulEndoFectinTM试剂。一边轻轻涡旋装有质粒溶液的试管,一边将DMEM培养基稀释的EndoFectinTM试剂滴加至试管中。充分混匀后,室温静置10分钟以形成DNA-EndofectinTM复合物。将复合物加入24孔板中,轻轻摇细胞培养板,使均匀混合。

(3)24小时后,根据双荧光素酶报告基因检测系统(promega)。倾倒细胞培养液后,每孔加入200ul报告基因细胞裂解液。于室温下裂解10分钟,待细胞充分裂解后,12,000rpmg离心5分钟,移液器洗取上清用于后续测定。融解海肾萤光素酶检测缓冲液,待达到室温。将海肾萤光素酶检测底物(100x)放置于冰盒上备用。

(4)按照检测每个孔的样品需要100ul检测工作液的量,配置适量海肾萤光素酶检测工作液。运用多功能酶标仪检测。每个组三个复孔。并记录数据。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm