关键词:EdU增殖 HOTAIR 卵巢上皮性癌 生物学 微量离心管 离心管 血清移

 

(1)细胞培养:取对数生长期的细胞,按照每孔约1x105个细胞接种于24孔板中,放入细胞培养箱中,培养至正常生长阶段。

(2)EdU标记用含有10%胎牛血清的1640培养基按1000:1的比例稀释EdU溶液(试剂A),制备适量的浓度为50uMEdU培养基。每孔加入200ul50uMEdU培养基,放入细胞培养箱中孵育2小时,然后弃培养基;然后PBS清洗细胞2次,每次5分钟。

(3)固定细胞:每孔加入200ul含4%多聚甲醛的细胞固定液,室温孵育10分钟,然后倾倒固定液。每孔加入200ul浓度为2mg/ml的甘氨酸,在摇床上孵育5分钟后,倾倒甘氨酸溶液。每孔加入200ulPBS,然后脱色摇床清洗5分钟,弃去PBS。每孔加入100ul含0.5%TritonX-100的PBS,然后脱色摇床孵育10分钟后,PBS清洗2次,每次5分钟。

(4)Apollo染色:每孔加入200ul的1xApollo®染色反应液,于室温下避光孵育30分钟后,弃掉染色反应液。加入200ul含0.5%TritonX-100的PBS作为渗透剂,然后在脱色摇床清洗3次,每次10分钟,然后弃掉渗透剂。每孔加入100ul甲醇,在摇床上清洗2次,每次5分钟。然后PBS再次清洗1次,每次5分钟。倾倒PBS液体。

(5)DNA染色:用双蒸水按50:1的比例稀释试剂F,配制适量1xHoechst33342DNA染色液,然后避光保存。每孔加入200ul1xHoechst33342DNA染色液,室温下避光孵育20分钟后,弃掉染色反应液。然后每孔每次加入200ulPBS清洗3次。

(6)在荧光显微镜下拍照,计数,然后分析结果。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm