关键词:IL-37 DC Th17细胞 Th1细胞 免疫反应 流式细胞术   微量离心管 离心管 血清移

 

(1)在超净台中将共培养细胞重悬于1ml1640培养基中,然后种于24孔板。

(2)在板中加入50ng/ml的PMA和1ug/ml的ionomycin各1ul/孔,吹打均匀,37℃细胞培养箱中培养1h。

(3)在板中再加入10ul/ml的BFA,2ul/孔,吹打均匀,37℃细胞培养箱中再培养4h。

(4)收集培养后的细胞,加入流式管中。

(5)加入1mlPBS混匀,室温离心,300gx10min,弃上清。

(6)加入100ul的流式buffer重悬细胞,再加入推荐量的抗人CD3和抗人CD8流式抗体,吹打均匀后4℃避光孵育30min。

(7)加入2ml流式buffer洗细胞,混匀后离心,300gx10min,弃上清。

(8)加入250ul流式破膜固定剂,吹打均匀后4℃避光孵育30min。

(9)加入2ml破膜buffer洗细胞,混匀后离心,300gx10min,弃上清。

(10)加入100ul破膜buffer重悬细胞,再加入推荐量的抗人IL-17和抗人IFN-γ流式抗体及相应的同型对照,吹打均匀后4℃避光孵育30min。

(11)加入2ml破膜buffer洗细胞,混匀后离心,300gx10min,弃上清。

(12)加入300ul破膜buffer重悬细胞,上机检测。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm