关键词:IL-37 DC Th17细胞 Th1细胞 免疫反应 ELISA IL-17 IFN-γ  微量离心管 离心管 血清移

 

  按照R&D公司ELISA试剂盒说明书步骤操作:

(1)使用PBS180倍稀释待测细胞因子的一抗(capture抗体),并加入ELISA板中,100ul/孔,膜封后避光室温孵育过夜。

(2)弃去板中液体,加入洗液(Washbuffer),300ul/孔,在摇床上摇2min。

(3)重复步骤(2)二次,弃去板中液体,拍干。

(4)加入封闭液(RegentDilent),300ul/孔,膜封后室温孵育1h以上。

(5)配制标准品:将标准品按照对应的细胞因子稀释至相应浓度,再进行逐级递减(下一级为上一级浓度的1/2)稀释,共稀释7个浓度,待用。

(6)重复步骤(2)三次,弃去板中液体,拍干,加入标准品或细胞上清,100ul/孔,摇床摇匀,膜封后室温下孵育2h以上。

(7)重复步骤(2)三次,弃去板中液体,拍干,使用封闭液180倍稀释待测细胞因子的二抗(Detective抗体),并加入ELISA板中,100ul/孔,膜封后避光室温孵育2h以上。

(8)重复步骤(2)三次,弃去板中液体,拍干,使用封闭液200倍稀释HRP,并加入ELISA板中,100ul/孔,膜封后避光室温孵育20min。

(9)重复步骤(2)三次,弃去板中液体,拍干,加入预先等比混匀的A液和B液混合液,100ul/孔,膜封后避光室温孵育20min。

(10)加入5%H2SO4,50ul/孔,终止反应。

(11)使用酶标仪检测OD值。

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm