关键词:Gadd45b 卒中后脑 Rho 微量离心管 离心管 血清移

 

G-LISARhoA活化检测生物化学试剂盒用于检测皮层神经元细胞内RhoA的活性。根据试剂盒说明书,大体操作如下:

(1)用负压吸尽培养基,用预冷的1×PBS漂洗爬片(5min×3次)

(2)每孔加入试剂盒中专用的细胞裂解液,用细胞刮刮取细胞悬液,转移至EP管中

(3)将EP管置于冰上裂解10min,离心(4℃,10000rpm×2min)

(4)吸取上清液至新的EP管中,用精密红外线优质蛋白检测剂来测定蛋白的浓度。

(5)根据说明书准备对照品(空白对照、阳性对照)和样品。冰上在培养孔内加100µl的冰水溶解粉末,剧烈的拍打培养板用力将液体弹出,于490nm波长处读数,保持数值在0.1~0.3范围内。

(6)每孔加入等量裂解物、空白对照、阳性对照,将培养板放在一个冰冷的轨道振荡器上,4℃下孵育30min。倒出液体,在室温下吸取200µl冲洗液反复冲洗两次,用力将液体弹出

(7)每孔加入适量的抗原呈递液,在室温下培养2min后,用洗板液洗板3次,用力拍干孔内液体

(8)每孔加入50µl的anti-RhoA一抗(1:250),置于轨道振荡器上室温孵育45min。

(9)每孔加入50µl的二抗,置于轨道振荡器上(室温,45min),用洗板液洗板3次,用力拍干孔内液体

(10)每孔内加入50µl的HRP反应试剂(37℃,15min)

(11)每孔内加入50µl的HRP终止液,在490nm波长下测定吸光度值。

 

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm