关键词:Gadd45b 卒中后脑 共聚焦显微镜 微量离心管 离心管 血清移

 

  采用免疫荧光染色后在共聚焦显微镜下观察,以检测Huwe1和Gadd45b在皮层神经元细胞中的共定位表达,具体的步骤如下:

负压吸尽培养基;1×PBS漂洗爬片(5min×3次);加入适量的4%PFA,固定(室温,60min);1×PBS漂洗爬片(5min×3次)加入0.2%TritonX-100(4℃,15min)加入3%BSA封闭液,封闭(4℃,30min)加入荧光一抗兔抗Huwe1(1:500)和鼠抗Gadd45b(1:500),4℃过夜;1×PBS漂洗爬片(5min×3次);加入荧光二抗(488nm和594nm,1:500),避光(室温,2h);1×PBS漂洗爬片(5min×3次);加入DAPI(1:100),避光(室温,10min);1×PBS漂洗爬片(5min×3次);用滤纸吸干细胞爬片周围多余的水分;滴加一滴封片剂(抗荧光淬灭)封片;在共聚焦显微镜下观察荧光双标染色的结果。

FV10-ASW3.1Viewer软件和ImageProPlus软件分析染色结果

 

实验所需耗材:

细胞培养板

细胞培养瓶

细胞培养皿

玻底培养皿

玻底培养板

细胞爬片

细胞刮刀

细胞筛网

血清瓶

细菌培养皿

接种环

接种针

冻存管

冻存盒

程序降温盒

离心管

微量离心管

血清移液管

巴氏吸管

移液吸头

8连管

96孔板

封板膜

封板刮刀

 

细胞培养板6孔

细胞培养板12孔

细胞培养板24孔

细胞培养板48孔

细胞培养板96孔

细胞培养锥形瓶

细胞培养透气盖悬浮摇瓶

细胞培养锥形瓶125ML

细胞培养锥形瓶250ML

细胞培养锥形瓶500ML

细胞培养锥形瓶1000ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶125ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶250ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶500ML

细胞培养透气盖悬浮摇瓶1000ML

硕华细胞培养瓶T25

硕华细胞培养瓶T75

硕华细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T25

耐思细胞培养瓶T75

耐思细胞培养瓶T125

耐思细胞培养瓶T175

耐思细胞培养瓶T225

细胞培养瓶密封盖

细胞培养瓶密封盖

细胞培养板平底TC处理无菌

耐思细胞培养皿35mm

耐思细胞培养皿60mm

耐思细胞培养皿100mm

耐思细胞培养皿1150mm

硕华细胞培养皿35mm

硕华细胞培养皿60mm

硕华细胞培养皿100mm

一次性培养皿

一次性细胞培养皿

无菌TC细胞培养皿

耐思玻底培养皿

硕华玻底培养皿

激光共聚焦培养皿

耐思玻底培养皿15mm

耐思玻底培养皿20mm

独立灭菌玻底培养皿

灭菌TC玻底培养皿

硕华玻底培养皿15mm

硕华玻底培养皿20mm